| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 海藻糖 | 第10页 |
| 1.1.2 海藻糖的生物学功能 | 第10-11页 |
| 1.1.3 海藻糖的作用保护机制 | 第11页 |
| 1.1.4 海藻糖生产方法的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.1.5 海藻糖的生物合成途径及相关酶 | 第12-13页 |
| 1.2 海藻糖合酶及国内外研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 海藻糖合酶的性质 | 第13-14页 |
| 1.2.2 海藻糖合酶的国内外研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 | 第15-16页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第16页 |
| 1.5 异源蛋白表达与纯化 | 第16-18页 |
| 1.6 固定化酶 | 第18-19页 |
| 1.7 立题依据和研究内容 | 第19-21页 |
| 1.7.1 论文立题依据 | 第19-20页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第2章 海藻糖合酶在大肠杆菌中的克隆与表达 | 第21-35页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.3 主要溶液和培养基的配置 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 引物设计与合成 | 第25页 |
| 2.3.2 重组表达质粒的构建 | 第25-27页 |
| 2.3.3 重组表达质粒在大肠杆菌BL21中的转化 | 第27页 |
| 2.3.4 重组菌株的诱导表达及产物鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.5 表达产物的分离纯化 | 第28页 |
| 2.3.6 表达产物的活性分析 | 第28-29页 |
| 2.4 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.4.1 TreS基因序列的获得 | 第29-30页 |
| 2.4.2 TreS基因扩增产物的鉴定 | 第30页 |
| 2.4.3 转化结果的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.4 重组表达载体的鉴定 | 第31页 |
| 2.4.5 重组蛋白表达条件的优化 | 第31-32页 |
| 2.4.6 重组蛋白的分离纯化 | 第32-33页 |
| 2.4.7 粗酶液活性的分析 | 第33-34页 |
| 2.4.8 纯化酶活性的分析 | 第34页 |
| 2.5 本章小结 | 第34-35页 |
| 第3章 海藻糖合酶在毕赤酵母中的克隆与表达 | 第35-47页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 主要材料 | 第36-39页 |
| 3.2.1 原料与菌株 | 第36页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第36-38页 |
| 3.2.3 主要溶液和培养基的配置 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.3.1 引物设计与合成 | 第39页 |
| 3.3.2 重组表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.3 重组表达质粒的转化 | 第40-41页 |
| 3.3.4 重组毕赤酵母的高拷贝筛选 | 第41-42页 |
| 3.3.5 重组毕赤酵母的PCR鉴定 | 第42页 |
| 3.3.6 转化子甲醇利用表型鉴定 | 第42页 |
| 3.3.7 重组蛋白的诱导表达与检测 | 第42-43页 |
| 3.4 结果与分析 | 第43-46页 |
| 3.4.1 PCR鉴定TreS扩增产物 | 第43页 |
| 3.4.2 pPICZαA质粒的提取 | 第43-44页 |
| 3.4.3 线性化重组质粒的鉴定 | 第44页 |
| 3.4.4 高拷贝重组毕赤酵母的筛选 | 第44页 |
| 3.4.5 重组毕赤酵母的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.6 重组毕赤酵母的表型确定 | 第45页 |
| 3.4.7 诱导菌体海藻糖合酶活性的检测 | 第45-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第4章 以壳聚糖为载体固定化海藻糖合酶的研究 | 第47-58页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.2.1 实验原料 | 第47页 |
| 4.2.2 主要试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-51页 |
| 4.3.1 固定化方法的探究 | 第48-49页 |
| 4.3.2 海藻糖合酶固定化条件优化 | 第49页 |
| 4.3.3 游离酶和固定化酶的酶学特性研究 | 第49-50页 |
| 4.3.4 固定化酶的稳定性研究 | 第50页 |
| 4.3.5 标准酶活的测定 | 第50-51页 |
| 4.3.6 高效液相色谱分析方法 | 第51页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第51-57页 |
| 4.4.1 固定化方法的选择 | 第51页 |
| 4.4.2 海藻糖合酶固定化条件的优化 | 第51-54页 |
| 4.4.3 固定化酶反应特性和稳定性研究 | 第54-57页 |
| 4.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第5章 结论与展望 | 第58-61页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 创新点 | 第58-59页 |
| 5.3 展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |