| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩写词表 | 第9-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-25页 |
| 1 鸭疫里默氏杆菌研究概况 | 第15-16页 |
| 1.1 鸭疫里默氏杆菌的生物学特点 | 第15页 |
| 1.2 鸭疫里默氏杆菌的毒力因子 | 第15-16页 |
| 1.3 鸭疫里默氏杆菌的疫苗研究进展 | 第16页 |
| 2 铁代谢在感染与免疫中的作用研究 | 第16-22页 |
| 2.1 铁代谢对机体维持健康的影响 | 第16-18页 |
| 2.1.1 宿主体内的铁代谢 | 第17页 |
| 2.1.2 宿主的“营养免疫”机制 | 第17-18页 |
| 2.1.3 铁代谢紊乱导致传染病的易感性增强 | 第18页 |
| 2.2 细菌的铁离子摄取机制 | 第18-21页 |
| 2.2.1 Siderophores介导的铁摄取系统 | 第18-20页 |
| 2.2.2 血红素摄取系统 | 第20-21页 |
| 2.2.3 亚铁离子转运系统 | 第21页 |
| 2.3 细菌的铁离子解毒机制 | 第21-22页 |
| 2.4 靶向微生物铁稳态治疗传染病 | 第22页 |
| 3 问题与展望 | 第22-23页 |
| 4 研究目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二部分 试验部分 | 第25-61页 |
| 第一章 鸭疫里默氏杆菌B739_1343基因缺失株及其回补株的构建 | 第25-42页 |
| 1 试验材料 | 第25-28页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第25-26页 |
| 1.2 引物 | 第26页 |
| 1.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.3.1 细菌培养基的配制 | 第26页 |
| 1.3.2 其它相关试剂的配制 | 第26-27页 |
| 1.4 分子操作 | 第27页 |
| 1.5 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2 试验方法 | 第28-34页 |
| 2.1 鸭疫里默氏杆菌B739_1343基因的生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.2 重组自杀性质粒pEX18GM::B739_1343-USD的构建 | 第28-32页 |
| 2.2.1 引物合成 | 第28页 |
| 2.2.2 PCR扩增B739_1343基因左右同源臂及SpcR抗性基因 | 第28-29页 |
| 2.2.3 构建B739_1343-USD片段 | 第29-30页 |
| 2.2.4 B739_1343-USD片段与质粒pEX18GM的双酶切及连接 | 第30-31页 |
| 2.2.5 连接产物转化入E.coli XL1-blue感受态细胞 | 第31-32页 |
| 2.2.6 阳性克隆的PCR鉴定 | 第32页 |
| 2.2.7 重组质粒pEX18GM::B739_1343-USD转化入供体菌E.coli S17-1 | 第32页 |
| 2.3 构建基因缺失株RA-CH-1△B739_1343 | 第32-33页 |
| 2.3.1 结合转移 | 第32-33页 |
| 2.3.2 突变株的PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.4 回补菌株RA-CH-1△B739_1343 pLMF03::B739_1343的构建 | 第33-34页 |
| 2.4.1 引物合成 | 第33页 |
| 2.4.2 回补质粒pLMF03::B739_1343的构建 | 第33-34页 |
| 2.4.3 基因缺失回补菌株的构建 | 第34页 |
| 3 试验结果 | 第34-40页 |
| 3.1 RA-CH-1 B739_1343基因的序列分析结果 | 第34-36页 |
| 3.2 B739_1343基因左右同源臂及SpcR抗性基因的PCR扩增 | 第36页 |
| 3.3 B739_1343-USD融合片段的构建 | 第36-37页 |
| 3.4 重组自杀质粒的构建 | 第37-38页 |
| 3.5 缺失株RA-CH-1△B739_1343的构建 | 第38-39页 |
| 3.6 回补菌株RA-CH-1△B739_1343 pLMF03::B739_1343的构建 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40页 |
| 5 小结 | 第40-42页 |
| 第二章 鸭疫里默氏杆菌B739_1343基因生物学功能分析 | 第42-54页 |
| 1 试验材料 | 第42-43页 |
| 1.1 菌株 | 第42页 |
| 1.2 实验动物 | 第42页 |
| 1.3 主要试剂 | 第42页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第42-43页 |
| 1.5 主要仪器 | 第43页 |
| 2 试验方法 | 第43-46页 |
| 2.1 RA-CH-1 B739_1343对Fe~(3+)利用的研究 | 第43-44页 |
| 2.1.1 限铁环境中生长曲线的测定 | 第43页 |
| 2.1.2 限铁TSA固体培养基中的生长情况 | 第43-44页 |
| 2.2 荧光定量PCR检测RA-CH-1B739_1343基因转录是否受铁调控 | 第44-45页 |
| 2.2.1 荧光定量PCR模板cDNA的制备 | 第44页 |
| 2.2.2 荧光定量PCR引物的设计 | 第44页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR标准曲线的绘制 | 第44-45页 |
| 2.2.4 荧光定量PCR检测样品 | 第45页 |
| 2.3 测定RA-CH-1△B739_1343缺失株的LD_(50)值 | 第45-46页 |
| 2.4 检测RA-CH-1,RA-CH-1△B739 1343在雏鸭体内的竞争定殖能力 | 第46页 |
| 2.5 数据的处理 | 第46页 |
| 3 试验结果 | 第46-51页 |
| 3.1 鸭疫里默氏杆菌CH-1 B739_1343参与铁离子的转运 | 第46-48页 |
| 3.1.1 限铁环境中生长曲线的对比 | 第46-47页 |
| 3.1.2 限铁固体培养基中B739_1343基因缺失株生长明显受损 | 第47-48页 |
| 3.2 鸭疫里默氏杆菌CH-B739_1343基因的转录水平不受铁离子调控 | 第48-49页 |
| 3.3 B739_1343基因的缺失引起鸭疫里默氏杆菌CH-1的毒力下降 | 第49-50页 |
| 3.4 B739_1343有助于鸭疫里默氏杆菌在雏鸭体内定殖 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-54页 |
| 第三章 RA-CH-1△B739_1343基因缺失株作为弱毒候选疫苗的评价 | 第54-61页 |
| 1 试验材料 | 第54-55页 |
| 1.1 菌株 | 第54页 |
| 1.2 试验动物 | 第54页 |
| 1.3 主要试剂 | 第54页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第54-55页 |
| 1.5 主要仪器 | 第55页 |
| 2 试验方法 | 第55-57页 |
| 2.1 动物免疫及样品采集 | 第55页 |
| 2.2 RA-CH-1△B739_1343弱毒株免疫雏鸭后的安全性检验和攻毒保护力测定 | 第55-56页 |
| 2.3 RA-CH-1△B739_1343弱毒株免疫雏鸭后的抗体水平检测 | 第56-57页 |
| 2.3.1 包被抗原的制备 | 第56页 |
| 2.3.2 间接ELISA检测鸭体内的抗体水平 | 第56-57页 |
| 2.4 数据的处理 | 第57页 |
| 3 试验结果 | 第57-60页 |
| 3.1 RA-CH-1△B739_1343作为弱毒疫苗的安全性评估 | 第57-58页 |
| 3.2 RA-CH-1△B739_1343的免疫保护力测定 | 第58-59页 |
| 3.3 RA-CH-1△B739_1343弱毒株免疫后雏鸭的IgY抗体水平监测 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61页 |
| 全文总结 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间完成的学术论文 | 第70页 |
