| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-29页 |
| 1.1 核酸序列多态性 | 第9-10页 |
| 1.1.1 核酸序列多态性简介 | 第9-10页 |
| 1.1.2 核酸序列多态性的研究意义 | 第10页 |
| 1.2 主流核酸序列分析技术 | 第10-18页 |
| 1.2.1 二代测序 | 第10-14页 |
| 1.2.2 荧光定量PCR | 第14-18页 |
| 1.3 恒温扩增技术的现状 | 第18-23页 |
| 1.3.1 核酸序列依赖性扩增(NASBA) | 第18-19页 |
| 1.3.2 环介导的恒温扩增(LAMP) | 第19-20页 |
| 1.3.3 DNA链置换扩增(SDA) | 第20-21页 |
| 1.3.4 重组酶聚合酶扩增(RPA) | 第21-22页 |
| 1.3.5 解旋酶依赖性核酸扩增(HDA) | 第22页 |
| 1.3.6 滚环扩增技术(RCA) | 第22-23页 |
| 1.4 滚环扩增研究进展 | 第23-27页 |
| 1.4.1 滚环扩增技术分类和特性 | 第23-25页 |
| 1.4.2 滚环扩增的应用 | 第25-27页 |
| 1.5 本课题研究内容及思路 | 第27-29页 |
| 第2章 材料与方法 | 第29-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-33页 |
| 2.1.1 DNA序列 | 第29-30页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.4 缓冲液配制 | 第32-33页 |
| 2.2 制备单链环状DNA方法 | 第33-35页 |
| 2.2.1 连接和酶切反应 | 第33页 |
| 2.2.2 环状DNA浓缩 | 第33-35页 |
| 2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea-PAGE) | 第35-36页 |
| 2.3.1 Urea-PAGE试剂的配制 | 第35页 |
| 2.3.2 聚丙烯酰胺的配制及电泳条件 | 第35-36页 |
| 2.4 RCA反应 | 第36-39页 |
| 2.4.1 RCA反应体系及条件 | 第36-37页 |
| 2.4.2 RCA反应产物的检测 | 第37-39页 |
| 第3章 环状单链DNA的制备 | 第39-55页 |
| 3.1 环状DNA形成条件的优化 | 第39-44页 |
| 3.1.1 前言与背景 | 第39页 |
| 3.1.2 Urea-PAGE的优化 | 第39-41页 |
| 3.1.3 锁式探针和连接模板浓度的优化 | 第41-43页 |
| 3.1.4 连接反应时间及温度的优化 | 第43-44页 |
| 3.1.5 实验结果与讨论 | 第44页 |
| 3.2 环状DNA的回收与浓缩 | 第44-47页 |
| 3.2.1 前言与背景 | 第44页 |
| 3.2.2 PCR产物试剂盒回收 | 第44-46页 |
| 3.2.3 乙醇沉降浓缩环状DNA | 第46-47页 |
| 3.2.4 实验结果与讨论 | 第47页 |
| 3.3 环状DNA的定性及定量分析 | 第47-53页 |
| 3.3.1 前言与背景 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Urea-PAGE初步鉴定单链环状DNA的形成与定量 | 第48-50页 |
| 3.3.3 琼脂糖凝胶鉴定单链环状DNA进行RCA反应 | 第50-52页 |
| 3.3.4 结果与讨论 | 第52-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 荧光定量RCA反应 | 第55-69页 |
| 4.1 荧光定量RCA反应组分的优化 | 第55-66页 |
| 4.1.1 前言与背景 | 第55页 |
| 4.1.2 不同荧光染料对RCA反应的影响 | 第55-57页 |
| 4.1.3 dNTPs浓度的优化 | 第57-58页 |
| 4.1.4 不同酶对RCA反应的影响 | 第58-60页 |
| 4.1.5 不同酶浓度对RCA反应的影响 | 第60-63页 |
| 4.1.6 环状DNA模板的浓度梯度 | 第63-66页 |
| 4.1.7 结果与讨论 | 第66页 |
| 4.2 荧光定量RCA的验证 | 第66-69页 |
| 4.2.1 环状探针的实时RCA和HRCA反应 | 第66-68页 |
| 4.2.2 结果与讨论 | 第68-69页 |
| 第5章 EGFR的T790M变异位点的检测 | 第69-75页 |
| 5.1 探针的设计 | 第69-70页 |
| 5.1.1 前言与背景 | 第69页 |
| 5.1.2 T790M位点探针的设计 | 第69-70页 |
| 5.2 T790M的检测 | 第70-75页 |
| 5.2.1 前言与背景 | 第70页 |
| 5.2.2 T790M探针检测条件的优化 | 第70-73页 |
| 5.2.3 结果与讨论 | 第73-75页 |
| 第6章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 6.1 结论 | 第75-76页 |
| 6.2 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |