| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-30页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第14-15页 |
| 1.2 病原学 | 第15-17页 |
| 1.2.1 PRRSV 分类地位 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PRRSV 形态结构 | 第16页 |
| 1.2.3 PRRSV 的生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.3 流行病学 | 第17页 |
| 1.4 致病机制和临床表现 | 第17-20页 |
| 1.4.1 致病机制 | 第17-19页 |
| 1.4.2 临床症状 | 第19-20页 |
| 1.4.3 剖检病变 | 第20页 |
| 1.5 PRRSV 基因组结构 | 第20-23页 |
| 1.5.1 PRRSV 非结构蛋白 | 第20-21页 |
| 1.5.2 PRRSV 结构蛋白 | 第21-23页 |
| 1.6 PRRSV 免疫学 | 第23-25页 |
| 1.6.1 体液免疫反应 | 第24页 |
| 1.6.2 细胞免疫反应 | 第24-25页 |
| 1.7 PRRSV 实验室诊断技术 | 第25-26页 |
| 1.7.1 病毒分离 | 第25页 |
| 1.7.2 RT-PCR 技术 | 第25页 |
| 1.7.3 免疫胶体金技术（IGSS） | 第25-26页 |
| 1.7.4 免疫过氧化物酶单层试验(IPMA) | 第26页 |
| 1.7.5 间接免疫荧光 (IFA) | 第26页 |
| 1.7.6 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第26页 |
| 1.8 PRRSV 防制 | 第26-27页 |
| 1.9 GP5 蛋白研究进展 | 第27-28页 |
| 1.10 研究目的及意义 | 第28-29页 |
| 1.11 技术路线 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-47页 |
| 2.1 材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 病毒 | 第30页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第30页 |
| 2.1.3 主要仪器试剂及来源 | 第30-32页 |
| 2.1.4 主要试剂的配置 | 第32-33页 |
| 2.1.4.1 EB 溶液的配制 | 第32页 |
| 2.1.4.2 电泳缓冲液 | 第32页 |
| 2.1.4.3 1.0%琼脂糖凝胶的配置 | 第32页 |
| 2.1.4.4 0.05% Tween-20 | 第32页 |
| 2.1.4.5 0.01M 柠檬酸盐缓冲液 | 第32页 |
| 2.1.4.6 LB 液体培养基 | 第32页 |
| 2.1.4.7 Buffer B 溶液 | 第32页 |
| 2.1.4.8 不同浓度一抗、二抗 | 第32页 |
| 2.1.4.9 0.01MPBS(1000ml 配制) | 第32-33页 |
| 2.1.4.10 细胞生长液 | 第33页 |
| 2.1.4.11 细胞维持液 | 第33页 |
| 2.1.4.12 细胞消化液 | 第33页 |
| 2.2 试验方法 | 第33-47页 |
| 2.2.1 细胞的复苏、传代培养及 PRRSV 增殖 | 第33-34页 |
| 2.2.1.1 Marc-145 细胞的复苏及传代培养 | 第33-34页 |
| 2.2.1.2 PRRSV 的增殖 | 第34页 |
| 2.2.2 病毒 RNA 的提取 | 第34页 |
| 2.2.3 病毒 RNA 的反转录 PCR | 第34-35页 |
| 2.2.4 病毒 ORF5 基因的扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.5 阳性 PCR 产物的纯化回收 | 第36页 |
| 2.2.6 PCR 产物与载体连接 | 第36-37页 |
| 2.2.7 感受态的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.8 转化感受态细胞 | 第38页 |
| 2.2.9 阳性质粒的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.10 重组质粒的的构建和鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2.10.1 引物设计 | 第39页 |
| 2.2.10.2 重组质粒 pET-GP5a 质粒的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.10.3 重组质粒 pET-GP5 质粒的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.11 重组质粒的诱导表达 | 第41-44页 |
| 2.2.11.1 阳性重组质粒转化表达感受态 | 第41页 |
| 2.2.11.2 重组质粒的诱导表达 | 第41-42页 |
| 2.2.11.3 SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第42-43页 |
| 2.2.11.4 重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| 2.2.11.5 重组蛋白的 Western blot 检测 | 第43-44页 |
| 2.2.12 重组蛋白抗血清的制备 | 第44-45页 |
| 2.2.12.1 免疫程序 | 第44页 |
| 2.2.12.2 ELISA 检测 | 第44-45页 |
| 2.2.12.3 抗血清的制备与纯化 | 第45页 |
| 2.2.13 重组蛋白抗血清中和效果的检测 | 第45-47页 |
| 2.2.13.1 抗血清中和效果的 ELISA 检测 | 第45-46页 |
| 2.2.13.2 抗血清病毒阻断实验 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-54页 |
| 3.1 ORF5 全基因克隆 | 第47页 |
| 3.2 GP5 重组基因表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.3 蛋白的诱导表达与纯化 | 第49-50页 |
| 3.4 蛋白的 Western-blot 检测 | 第50-51页 |
| 3.5 重组蛋白抗血清的制备结果 | 第51-53页 |
| 3.6 抗血清中和效果的检验结果 | 第53-54页 |
| 3.6.1 ELISA 检测结果 | 第53页 |
| 3.6.2 抗血清病毒阻断实验结果 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
