| 符号说明 | 第4-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1. 引言 | 第10-24页 |
| 1.1 多基因共表达的构建 | 第10-18页 |
| 1.1.1 多启动子载体构建 | 第10-11页 |
| 1.1.2 表达融合基因 | 第11页 |
| 1.1.3 基因之间以 IRES 序列连接 | 第11-12页 |
| 1.1.4 基因之间以 2A 序列连接 | 第12-18页 |
| 1.2 PID1 与 CuZnSOD 双基因的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 影响肌内脂肪含量的相关基因 | 第18-19页 |
| 1.2.2 PID1 基因的研究进展： | 第19页 |
| 1.2.3 影响抗氧化性能 CuZnSOD 基因研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 转染技术 | 第20-23页 |
| 1.3.1 脂质体转染法 | 第20-22页 |
| 1.3.2 其他转染方法 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 2. 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌株、细胞与载体 | 第24页 |
| 2.1.2 主要设备 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂与内切酶 | 第25页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第25-27页 |
| 2.1.5 主要数据库及生物软件 | 第27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 总 RNA 提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2 反转录合成 cDNA | 第28页 |
| 2.2.3 目的基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.4 目的基因的回收纯化与测序鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.5 目的基因转化测序 | 第30页 |
| 2.2.6 目的基因与载体的双酶切 | 第30-31页 |
| 2.2.7 目的基因与真核表达载体连接 | 第31页 |
| 2.2.8 重组质粒酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.9 无内毒素质粒大提 | 第32-34页 |
| 2.2.10 PK15 细胞培养 | 第34-35页 |
| 2.2.11 PK15 细胞的转染 | 第35页 |
| 2.2.12 Real-time PCR 检测 mRNA 表达 | 第35-36页 |
| 2.2.13 Western blot 检测蛋白表达 | 第36-37页 |
| 2.2.14 数据分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-46页 |
| 3.1 PCR 扩增 PID1 基因与 CuZnSOD 基因结果 | 第38页 |
| 3.2 2A 肽的合成 | 第38-39页 |
| 3.3 重组载体 pIRES2-CuZnSOD 载体酶切鉴定 | 第39页 |
| 3.4 重组载体 pIRES2-CuZnSOD-PID1 载体酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 3.5 重组载体 pIRES2-CuZnSOD-PID1 载体测序鉴定 | 第40-41页 |
| 3.6 重组质粒转染 PK15 细胞 | 第41-42页 |
| 3.7 细胞 RNA 的提取 | 第42页 |
| 3.8 实时荧光定量 PCR | 第42-43页 |
| 3.9 转染重组质粒细胞 CuZnSOD 基因与 PID1 基因表达水平分析 | 第43-44页 |
| 3.9.1 重组载体中 CuZnSOD 基因的表达 | 第43-44页 |
| 3.9.2 重组载体中 PID1 基因的表达 | 第44页 |
| 3.10 转染重组质粒细胞 CuZnSOD 蛋白与 PID1 蛋白表达 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 4.1 PID1 基因与 CuZnSOD 基因对肉质的影响 | 第46-47页 |
| 4.2 2A 肽介导载体的构建 | 第47页 |
| 4.3 脂质体转染效率 | 第47-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第59页 |
