| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第11页 |
| 1.2 肌纤维的分类及与肉质的关系 | 第11-12页 |
| 1.2.1 肌纤维的类型及特点 | 第11页 |
| 1.2.2 不同肌纤维类型对肌肉品质的影响 | 第11-12页 |
| 1.3 骨骼肌纤维类型的形成与转换及其调控机制 | 第12-14页 |
| 1.3.1 骨骼肌纤维类型的形成 | 第12-13页 |
| 1.3.2 骨骼肌纤维类型的转换 | 第13页 |
| 1.3.3 骨骼肌纤维类型形成和转换的分子调控机制 | 第13-14页 |
| 1.4 ANKRD基因家族的两个基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 利用TOPO & Gateway克隆技术和慢病毒表达载体系统研究基因功能 | 第15-16页 |
| 1.6 利用siRNA技术研究ANKRD家族两个基因功能 | 第16-18页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-28页 |
| 2.1 材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 组织及DNA样品 | 第19页 |
| 2.1.2 载体,菌株和细胞系 | 第19-21页 |
| 2.1.3 主要试剂及技术支持 | 第21-22页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要仪器设备及耗材 | 第23页 |
| 2.1.6 主要分子生物学软件及数据库 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 肌肉组织RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 反转录 | 第24页 |
| 2.2.3 慢病毒载体构建 | 第24-25页 |
| 2.2.4 细胞培养和病毒包装 | 第25-26页 |
| 2.2.5 Stealth siRNA筛选及检测 | 第26页 |
| 2.2.6 QPCR检测超表达和干扰效率以及快慢肌特异表达基因 | 第26-28页 |
| 3 结果 | 第28-38页 |
| 3.1 ANKRD基因家族两个基因的CDS克隆 | 第28-29页 |
| 3.1.1 猪ANKRD1,ANKRD2基因的CDS克隆 | 第28页 |
| 3.1.2 小鼠ANKRD1,ANKRD2基因的CDS克隆 | 第28-29页 |
| 3.2 猪和小鼠pENTR/SD/D-TOPO载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.3 LR重组与慢病毒载体的构建 | 第30-31页 |
| 3.4 病毒包装及超表达QPCR检测 | 第31-33页 |
| 3.5 有效siRNA筛选及RNAi效果检测 | 第33-38页 |
| 3.5.1 小鼠mANKRD1基因有效siRNA筛选 | 第33-34页 |
| 3.5.2 小鼠mANKRD2基因有效siRNA筛选 | 第34-35页 |
| 3.5.3 利用QPCR检测干扰效率以及快慢肌特异表达基因 | 第35-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 4.1 关于pENTR-TOPO载体和慢病毒构建 | 第38页 |
| 4.2 关于病毒包装和细胞感染 | 第38页 |
| 4.3 关于超表达对增殖期肌细胞中慢肌特异表达基因的调控作用 | 第38-39页 |
| 4.4 关于RNAi对增殖期肌细胞中快慢肌特异表达基因的调控作用 | 第39页 |
| 4.5 关于ANKRD家族对分化期肌细胞中快慢肌特异表达基因的调控作用 | 第39-40页 |
| 4.6 关于ANKRD家族对不同类型肌纤维的影响 | 第40-41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 5.1 本研究获得的结果 | 第41页 |
| 5.2 本研究的创新点与特色 | 第41页 |
| 5.3 本研究的不足之处以及下一步值得研究的工作 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
