| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-35页 |
| 1.1 Toll样受体的发现和种类 | 第16-20页 |
| 1.2 TLRs的结构 | 第20-21页 |
| 1.3 TLRs对细菌性配体的识别 | 第21-30页 |
| 1.3.1 TLR1和TLR2 | 第22-23页 |
| 1.3.2 TLR4 | 第23-26页 |
| 1.3.3 TLR5 | 第26-27页 |
| 1.3.4 TLR9 | 第27-29页 |
| 1.3.5 非哺乳类TLRs | 第29-30页 |
| 1.4 TLRs信号通路 | 第30-32页 |
| 1.4.1 My D88依赖型信号通路 | 第30-32页 |
| 1.4.2 My D88非依赖型信号通路 | 第32页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第32-35页 |
| 第二章 淇河鲫TLRs对嗜水气单胞菌感染的表达响应 | 第35-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 实验鱼 | 第35页 |
| 2.1.2 嗜水气单胞菌 | 第35-36页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-43页 |
| 2.2.1 嗜水气单胞菌攻毒及样品采集 | 第36页 |
| 2.2.2 总RNA提取及c DNA合成 | 第36-38页 |
| 2.2.3 淇河鲫TLRs基因部分片段克隆 | 第38-41页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR | 第41-43页 |
| 2.2.5 数据分析 | 第43页 |
| 2.3 结果与分析 | 第43-46页 |
| 2.3.1 淇河鲫总RNA提取 | 第43页 |
| 2.3.2 淇河鲫13种TLRs基因部分片段克隆 | 第43-44页 |
| 2.3.3 淇河鲫13种TLRs对嗜水气单胞菌感染的表达响应 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-49页 |
| 2.5 小结 | 第49-51页 |
| 第三章 淇河鲫TLR5/TLR22/My D88/TRAF6基因克隆及序列分析 | 第51-85页 |
| 3.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1 实验鱼 | 第51页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-57页 |
| 3.2.1 脾脏总RNA提取及c DNA合成 | 第52页 |
| 3.2.2 TLR5/TLR22/My D88/TRAF6 c DNA序列克隆 | 第52-55页 |
| 3.2.3 淇河鲫肌肉基因组DNA提取 | 第55页 |
| 3.2.4 TLR5/TLR22/My D88/TRAF6基因组DNA序列扩增 | 第55-56页 |
| 3.2.5 序列分析 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与分析 | 第57-80页 |
| 3.3.1 淇河鲫TLR5序列分析 | 第57-63页 |
| 3.3.2 淇河鲫TLR22序列分析 | 第63-70页 |
| 3.3.3 淇河鲫My D88序列分析 | 第70-76页 |
| 3.3.4 淇河鲫TRAF6序列分析 | 第76-80页 |
| 3.4 讨论 | 第80-82页 |
| 3.5 小结 | 第82-85页 |
| 第四章 淇河鲫TLR5/TLR22及信号通路关键基因表达分析 | 第85-119页 |
| 4.1 实验材料 | 第85-86页 |
| 4.1.1 实验鱼 | 第85-86页 |
| 4.1.2 嗜水气单胞菌 | 第86页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第86页 |
| 4.2 实验方法 | 第86-89页 |
| 4.2.1 淇河鲫胚胎发育不同时期样品采集 | 第86-87页 |
| 4.2.2 淇河鲫不同组织器官样品采集 | 第87页 |
| 4.2.3 嗜水气单胞菌、鞭毛蛋白和Poly I:C攻毒及样品采集 | 第87页 |
| 4.2.4 总RNA提取及c DNA合成 | 第87页 |
| 4.2.5 淇河鲫IL-1β、IL-8 和TNFα 部分片段的克隆 | 第87-88页 |
| 4.2.6 实时荧光定量PCR | 第88-89页 |
| 4.2.7 数据分析 | 第89页 |
| 4.3 结果与分析 | 第89-113页 |
| 4.3.1 淇河鲫总RNA提取 | 第89页 |
| 4.3.2 淇河鲫IL-1β、IL-8 和TNFα 部分片段的克隆 | 第89页 |
| 4.3.3 淇河鲫TLR5的表达分析 | 第89-93页 |
| 4.3.4 淇河鲫TLR22的表达分析 | 第93-97页 |
| 4.3.5 淇河鲫My D88的表达分析 | 第97-101页 |
| 4.3.6 淇河鲫TRAF6的表达分析 | 第101-106页 |
| 4.3.7 攻毒后淇河鲫促炎细胞因子IL-1β、IL-8 和TNFα 的表达变化 | 第106-113页 |
| 4.4 讨论 | 第113-118页 |
| 4.4.1 淇河鲫胚胎发育过程中TLR5/TLR22/My D88/TRAF6的表达变化 | 第113-114页 |
| 4.4.2 淇河鲫不同组织器官中TLR5/TLR22/My D88/TRAF6的表达 | 第114-115页 |
| 4.4.3 攻毒后淇河鲫TLR5/TLR22及信号通路关键基因的表达响应 | 第115-118页 |
| 4.5 小结 | 第118-119页 |
| 第五章 淇河鲫TLR5/TLR22/My D88/TRAF6的原核表达及多克隆抗体制备 | 第119-131页 |
| 5.1 实验材料 | 第119-120页 |
| 5.1.1 细菌与载体 | 第119页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第119-120页 |
| 5.2 实验方法 | 第120-125页 |
| 5.2.1 原核表达载体的构建 | 第120-122页 |
| 5.2.2 融合蛋白诱导表达条件的优化 | 第122-123页 |
| 5.2.3 融合蛋白可溶性分析 | 第123页 |
| 5.2.4 大量融合蛋白的制备及纯化 | 第123页 |
| 5.2.5 多克隆抗体的制备 | 第123-124页 |
| 5.2.6 SDS-PAGE | 第124页 |
| 5.2.7 Western blot | 第124-125页 |
| 5.3 结果与分析 | 第125-128页 |
| 5.3.1 目的片段的扩增及重组表达载体的构建 | 第125页 |
| 5.3.2 融合蛋白表达条件的优化 | 第125-126页 |
| 5.3.3 融合蛋白可溶性分析 | 第126页 |
| 5.3.4 融合蛋白的纯化 | 第126-128页 |
| 5.3.5 多克隆抗体的制备 | 第128页 |
| 5.4 讨论 | 第128-129页 |
| 5.5 小结 | 第129-131页 |
| 第六章 淇河鲫TLR5/TLR22/My D88/TRAF6信号转导功能的初步研究 | 第131-141页 |
| 6.1 实验材料 | 第131-132页 |
| 6.1.1 细胞和载体 | 第131页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第131-132页 |
| 6.2 实验方法 | 第132-135页 |
| 6.2.1 真核表达载体的构建 | 第132页 |
| 6.2.2 无内毒素质粒的提取 | 第132-133页 |
| 6.2.3 重组质粒的转染 | 第133-134页 |
| 6.2.4 亚细胞定位 | 第134页 |
| 6.2.5 双荧光素酶报告基因检测 | 第134-135页 |
| 6.3 结果与分析 | 第135-138页 |
| 6.3.1 目的片段的扩增及重组表达载体的构建 | 第135页 |
| 6.3.2 亚细胞定位 | 第135-137页 |
| 6.3.3 过表达TLR5/TLR22/My D88/TRAF6对NF-κB活性的影响 | 第137-138页 |
| 6.4 讨论 | 第138-139页 |
| 6.5 小结 | 第139-141页 |
| 第七章 全文总结 | 第141-145页 |
| 参考文献 | 第145-159页 |
| 附录A 主要试剂配制 | 第159-161页 |
| 附录B 主要仪器设备 | 第161-163页 |
| 致谢 | 第163-165页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第165-167页 |
