| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 Akirin2 基因研究进展 | 第11-21页 |
| ·Akirin2 基因的发现与结构特点 | 第11-12页 |
| ·Akirin 基因的发现与命名 | 第11页 |
| ·Akirin2 基因的结构和表达 | 第11-12页 |
| ·Akirin2 蛋白的功能预测 | 第12-15页 |
| ·蛋白预测常用方法 | 第12-13页 |
| ·基于序列分析与分子生物学实验的Akirin2 功能预测 | 第13-15页 |
| ·Akirin2 的功能特点 | 第15-16页 |
| ·Akirin2 的存在促进IL-6 的表达 | 第15页 |
| ·Akirin2 的表达与肌肉发育相关联 | 第15-16页 |
| ·昆虫Akirin 与哺乳动物Akirin2 体内激活过程分析 | 第16-17页 |
| ·Akirin 在昆虫体内的激活过程 | 第16页 |
| ·Akirin2 在哺乳动物体内激活过程 | 第16-17页 |
| ·Akirin 和Akirin2 激活过程比较 | 第17页 |
| ·Akirin2 位于NF-κB 通路中的位置 | 第17-21页 |
| ·NF-κB 信号通路 | 第17-19页 |
| ·Akirin2 位于NF-κB 通路的下游 | 第19-21页 |
| 第二章 猪Akirin2 基因的克隆和序列分析 | 第21-32页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·样品来源 | 第21页 |
| ·工程菌种和质粒来源 | 第21页 |
| ·试剂和设备 | 第21-22页 |
| ·分子生物学分析软件和数据库 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-27页 |
| ·电子克隆猪Akirin2 | 第22页 |
| ·分子克隆猪Akirin2 | 第22-25页 |
| ·阳性重组质粒酶切鉴定和测序 | 第25-26页 |
| ·猪Akirin2 基因序列和蛋白序列分析 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·电子克隆结果 | 第27页 |
| ·PCR 产物电泳结果 | 第27页 |
| ·重组质粒酶切电泳结果 | 第27-28页 |
| ·测序结果与序列分析 | 第28页 |
| ·猪源Akirin2 的外显子软件预测结果 | 第28-29页 |
| ·猪源Akirin2 蛋白二级结构预测 | 第29页 |
| ·Akirin2 进化分析 | 第29-30页 |
| ·猪Akirin2 蛋白与其它物种同源比较结果 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| ·电子克隆在新基因识别中的作用 | 第30页 |
| ·序列分析软件在蛋白质功能研究中的作用 | 第30-31页 |
| ·猪可替代小鼠做为研究人源Akirin2 的模式生物 | 第31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第三章 猪Akirin2 基因在大肠杆菌中表达 | 第32-39页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·试剂和酶 | 第32页 |
| ·工程菌和质粒 | 第32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·pET-Akirin2 重组载体的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| ·pET-Akirin2 重组质粒转化表达菌BL21 及鉴定 | 第33页 |
| ·pET-Akirin2 重组质粒阳性菌BL21 诱导表达 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE 检测融合蛋白表达 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白纯化 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-37页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·IPTG 诱导融合蛋白表达的SDS-PAGE 结果与分析 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白纯化后SDS-PAGE 结果与分析 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌表达系统的优点与不足 | 第37页 |
| ·大肠杆菌表达条件的优化 | 第37页 |
| ·His 标签蛋白纯化影响因素 | 第37-38页 |
| ·His-Akirin2 融合蛋白表达特点 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第四章 猪Akirin2 在哺乳动物细胞中表达 | 第39-49页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·载体，细胞和菌种 | 第39页 |
| ·酶和试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·构建pEGFP-Akirin2 重组真核表达载体 | 第39-42页 |
| ·细胞培养和质粒转染 | 第42-43页 |
| ·Western blot 检测目的蛋白 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-47页 |
| ·pEGFP-Akirin2 双酶切鉴定和测序结果 | 第44页 |
| ·质粒浓度检测结果 | 第44-45页 |
| ·猪脐静脉血管内皮细胞形态观察 | 第45页 |
| ·转染后猪脐静脉血管内皮细胞形态观察 | 第45-46页 |
| ·表达产物Western blot 分析 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第47页 |
| ·转染方法的选择 | 第47页 |
| ·影响脂质体转染效率的因素 | 第47-48页 |
| ·蛋白细胞定位的方法 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-60页 |
| 缩略词 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 个人简介 | 第62页 |
