| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-26页 |
| 1.1 米根霉 | 第10页 |
| 1.2 脂类水解酶的概述 | 第10-12页 |
| 1.2.1 酯酶 | 第11页 |
| 1.2.2 脂肪酶 | 第11-12页 |
| 1.3 脂类水解酶的研究进展 | 第12-20页 |
| 1.3.1 酯酶与脂肪酶的来源及理化性质 | 第12页 |
| 1.3.2 酯酶与脂肪酶的分类 | 第12-13页 |
| 1.3.3 酯酶与脂肪酶的结构 | 第13页 |
| 1.3.4 酯酶与脂肪酶的催化机理 | 第13-14页 |
| 1.3.5 酯酶与脂肪酶的区别 | 第14-15页 |
| 1.3.6 脂类水解酶基因的分子生物学研究 | 第15-18页 |
| 1.3.7 脂类水解酶的应用 | 第18-20页 |
| 1.3.8 米根霉脂肪酶的应用 | 第20页 |
| 1.4 巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第20-24页 |
| 1.4.1 巴斯德毕赤酵母表达系统的特点 | 第20-21页 |
| 1.4.2 巴斯德毕赤酵母表达载体 | 第21-22页 |
| 1.4.3 巴斯德毕赤酵母表达的宿主菌 | 第22页 |
| 1.4.4 表达载体的转化及与毕赤酵母的整合 | 第22-23页 |
| 1.4.5 影响外源蛋白表达的因素 | 第23-24页 |
| 1.4.6 巴斯德毕赤酵母表达系统的应用前景 | 第24页 |
| 1.5 本课题的研究意义及主要内容 | 第24-26页 |
| 第二章 米根霉脂类水解酶基因的克隆及序列分析 | 第26-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 引物合成及DNA测序 | 第27页 |
| 2.1.4 常用溶液 | 第27-28页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.1.6 培养基 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 核酸提取 | 第29-31页 |
| 2.2.2 米根霉脂类水解酶基因的克隆 | 第31-34页 |
| 2.2.3 米根霉脂类水解酶的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-48页 |
| 2.3.1 米根霉脂类水解酶基因的克隆 | 第35-37页 |
| 2.3.2 米根霉脂类水解酶基因的内含子序列分析 | 第37-38页 |
| 2.3.3 米根霉脂类水解酶基因的编码区序列分析 | 第38-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-50页 |
| 第三章 米根霉脂类水解酶基因的异源表达 | 第50-72页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第50页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第50-51页 |
| 3.1.3 引物合成及DNA测序 | 第51页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第51页 |
| 3.1.5 常用溶液 | 第51页 |
| 3.1.6 培养基 | 第51-52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-59页 |
| 3.2.1 毕赤酵母表达重组质粒的构建 | 第52-55页 |
| 3.2.2 重组毕赤酵母菌株的构建 | 第55-56页 |
| 3.2.3 重组毕赤酵母菌株的筛选 | 第56-57页 |
| 3.2.4 表达产物SDS-PAGE分析 | 第57页 |
| 3.2.5 脂类水解酶的酶活测定 | 第57-58页 |
| 3.2.6 重组米根霉脂类水解酶粗酶液的基本酶学性质研究 | 第58-59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-70页 |
| 3.3.1 重组米根霉脂类水解酶的载体构建 | 第59-61页 |
| 3.3.2 重组米根霉脂类水解酶的表达及筛选 | 第61页 |
| 3.3.3 重组米根霉脂类水解酶的SDS-PAGE分析 | 第61-62页 |
| 3.3.4 重组酶crRol-428的基本酶学性质研究 | 第62-64页 |
| 3.3.5 重组酶crRol-9852的基本酶学性质研究 | 第64-65页 |
| 3.3.6 重组酶crRol-9898的基本酶学性质研究 | 第65-66页 |
| 3.3.7 重组酶crRol-14195的基本酶学性质研究 | 第66-68页 |
| 3.3.8 重组酶crRol-14186的基本酶学性质研究 | 第68-69页 |
| 3.3.9 重组酶crRol-9910的基本酶学性质研究 | 第69-70页 |
| 3.4 小结 | 第70-72页 |
| 第四章 重组酶rRol-9852和rRol-9898的分离纯化及性质研究 | 第72-93页 |
| 4.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 4.1.1 菌株 | 第72页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第72页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第72页 |
| 4.1.4 常用溶液 | 第72页 |
| 4.1.5 培养基 | 第72-73页 |
| 4.2 实验方法 | 第73-76页 |
| 4.2.1 重组酶rRol-9852和rRol-9898的分离纯化 | 第73-74页 |
| 4.2.2 重组酶rRol-9852和rRol-9898的SDS-PAGE分析 | 第74页 |
| 4.2.3 BCA法测定蛋白浓度 | 第74页 |
| 4.2.4 脂类水解酶的酶活测定 | 第74页 |
| 4.2.5 重组酶rRol-9852和rRol-9898的酶学性质研究 | 第74-76页 |
| 4.3 结果与分析 | 第76-91页 |
| 4.3.1 重组酶rRol-9852和rRol-9898的分离纯化 | 第76-78页 |
| 4.3.2 重组酶rRol-9852的酶学性质研究 | 第78-83页 |
| 4.3.3 重组酶rRol-9898的酶学性质研究 | 第83-91页 |
| 4.4 小结 | 第91-93页 |
| 结论与展望 | 第93-96页 |
| 结论 | 第93-95页 |
| 展望 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 个人简历 | 第106页 |
