大肠杆菌K4软骨素合酶（KfoC）底物适应性分析及单糖供体对酶催化活性的影响
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 符号说明 | 第16-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-25页 |
| 1 硫酸软骨素 | 第18-19页 |
| 1.1 蛋白质糖基化与硫酸软骨素 | 第18-19页 |
| 1.2 硫酸软骨素 | 第19页 |
| 1.3 硫酸软骨素的生理作用及应用 | 第19页 |
| 2 硫酸软骨素制备 | 第19-21页 |
| 2.1 动物组织提取法 | 第19-20页 |
| 2.2 微生物发酵法 | 第20页 |
| 2.3 化学酶法 | 第20-21页 |
| 3 大肠杆菌K4及软骨素合酶KfoC | 第21-23页 |
| 3.1 硫酸软骨素生产菌株 | 第21-22页 |
| 3.2 大肠杆菌K4 | 第22页 |
| 3.3 软骨素合酶KfoC | 第22-23页 |
| 4 生物大分子作用仪原理及应用 | 第23-24页 |
| 4.1 生物大分子作用仪原理 | 第23页 |
| 4.2 生物大分子作用仪应用 | 第23-24页 |
| 5 课题内容及重要意义 | 第24-25页 |
| 第二章 酶的重组表达与活性验证 | 第25-31页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| 1.1 试剂 | 第25-26页 |
| 1.2 主要仪器 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-29页 |
| 2.1 设计与合成引物 | 第26-27页 |
| 2.2 KfoC基因克隆与转化 | 第27-28页 |
| 2.3 KfoC蛋白表达 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-31页 |
| 第三章 酶的底物适应性分析 | 第31-47页 |
| 1 材料 | 第31-32页 |
| 1.1 试剂耗材 | 第31-32页 |
| 1.2 主要仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-39页 |
| 2.1 KfoC活性验证 | 第32-34页 |
| 2.2 几种UDP-sugar的制备 | 第34-35页 |
| 2.3 几种GAG寡糖及部分衍生物的制备 | 第35-37页 |
| 2.4 GalNAc-T底物特异性分析 | 第37-38页 |
| 2.5 MS与NMR鉴定部分产物的结构 | 第38页 |
| 2.6 KfoC最适引物验证 | 第38-39页 |
| 3. 结果 | 第39-45页 |
| 3.1 KfoC活性验证 | 第39-40页 |
| 3.2 供体耐受性液相结果 | 第40-41页 |
| 3.3 受体特异性液相结果 | 第41-43页 |
| 3.4 MS和NMR鉴定部分产物的结果 | 第43-44页 |
| 3.5 KfoC最适受体分析 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 酶与底物的相互作用分析 | 第47-57页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| 1.1 试剂耗材 | 第47页 |
| 1.2 主要仪器 | 第47页 |
| 2 方法与结果 | 第47-54页 |
| 2.1 pH scouting | 第47-48页 |
| 2.2 蛋白偶联 | 第48-49页 |
| 2.3 动力学测试 | 第49-50页 |
| 2.4 酶与底物的相互作用分析 | 第50-54页 |
| 3 讨论 | 第54-57页 |
| 总结与展望 | 第57-59页 |
| 1 全文总结 | 第57-58页 |
| 2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第65-66页 |
| 附件 | 第66-78页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第78页 |
