| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-31页 |
| 1.1 脂肪酶 | 第15-19页 |
| 1.1.1 脂肪酶的简介 | 第15-17页 |
| 1.1.2 脂肪酶的结构特征 | 第17-18页 |
| 1.1.3 脂肪酶非水介质体系的催化特性 | 第18-19页 |
| 1.2 米曲霉及其脂肪酶 | 第19-22页 |
| 1.2.1 米曲霉的简介 | 第19-20页 |
| 1.2.2 米曲霉脂肪酶的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3 脂肪酶在维生素类药物合成中的应用 | 第22-26页 |
| 1.3.1 脂肪酶催化立体选择性反应 | 第22-24页 |
| 1.3.2 脂肪酶催化区域选择性反应 | 第24-25页 |
| 1.3.3 脂肪酶催化合成维生素酯类衍生物 | 第25-26页 |
| 1.4 维生素A及其化学合成的研究 | 第26-29页 |
| 1.4.1 维生素A的简介 | 第26-27页 |
| 1.4.2 维生素A的化学合成工艺 | 第27-29页 |
| 1.5 立题依据、研究意义及主要研究内容 | 第29-31页 |
| 1.5.1 立题依据及研究意义 | 第29-30页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第30-31页 |
| 第二章 脂肪酶转酯化活性筛选模型的建立及微生物的筛选 | 第31-47页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.2.1 脂肪酶 | 第32页 |
| 2.2.2 试剂与材料 | 第32页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-36页 |
| 2.3.1 试剂的配制 | 第33页 |
| 2.3.2 脂肪酶转酯化反应体系 | 第33页 |
| 2.3.3 酚试剂检测方法 | 第33-34页 |
| 2.3.4 脂肪酶转酯化转化率与酶活力的计算方法 | 第34-35页 |
| 2.3.5 气相色谱检测方法 | 第35页 |
| 2.3.6 微生物的培养方法 | 第35页 |
| 2.3.7 菌株WZ007的微生物鉴定方法 | 第35-36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-45页 |
| 2.4.1 酚试剂法最适检测波长的确定 | 第36-37页 |
| 2.4.2 酚试剂法衍生化最适时间的确定 | 第37-38页 |
| 2.4.3 酚试剂法衍生化最适温度的确定 | 第38-39页 |
| 2.4.4 酚试剂法标准曲线的建立 | 第39-40页 |
| 2.4.5 利用气相色谱法的验证实验 | 第40-41页 |
| 2.4.6 脂肪酶转酯化活性微生物的筛选 | 第41-42页 |
| 2.4.7 菌株WZ007的微生物鉴定 | 第42-45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 米曲霉WZ007脂肪酶的分离纯化与酶学性质研究 | 第47-68页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-49页 |
| 3.2.1 菌株 | 第47-48页 |
| 3.2.2 微生物培养基 | 第48页 |
| 3.2.3 缓冲液 | 第48页 |
| 3.2.4 试剂与材料 | 第48页 |
| 3.2.5 主要仪器 | 第48-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-55页 |
| 3.3.1 米曲霉WZ007的培养 | 第49页 |
| 3.3.2 米曲霉WZ007脂肪酶的分离与纯化 | 第49-51页 |
| 3.3.3 蛋白质浓度测定 | 第51-52页 |
| 3.3.4 酶活测定方法 | 第52页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE分析 | 第52-53页 |
| 3.3.6 米曲霉WZ007脂肪酶的酶学性质研究 | 第53-54页 |
| 3.3.7 脂肪酶的MALDI-TOF-MS分析 | 第54-55页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第55-67页 |
| 3.4.1 米曲霉WZ007脂肪酶的分离与纯化 | 第55-58页 |
| 3.4.2 脂肪酶纯度鉴定及分子量测定 | 第58页 |
| 3.4.3 米曲霉脂肪酶的酶学性质研究 | 第58-65页 |
| 3.4.4 脂肪酶的质谱分析 | 第65-67页 |
| 3.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 米曲霉脂肪酶的基因克隆、表达与结构分析 | 第68-79页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 实验材料 | 第68-70页 |
| 4.2.1 菌种、质粒及引物 | 第68页 |
| 4.2.2 试剂与材料 | 第68-69页 |
| 4.2.3 微生物培养基 | 第69页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第69-70页 |
| 4.3 实验方法 | 第70-72页 |
| 4.3.1 米曲霉WZ007的培养 | 第70页 |
| 4.3.2 米曲霉WZ007 cDNA的制备 | 第70页 |
| 4.3.3 aol基因PCR引物设计 | 第70页 |
| 4.3.4 aol基因PCR扩增 | 第70页 |
| 4.3.5 重组表达载体pEASY-E1-aol的构建及鉴定 | 第70-71页 |
| 4.3.6 重组菌的构建与表达 | 第71页 |
| 4.3.7 重组菌脂肪酶的分离与纯化 | 第71页 |
| 4.3.8 重组菌脂肪酶的活力测定 | 第71-72页 |
| 4.3.9 米曲霉脂肪酶AOL的序列分析及同源建模 | 第72页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第72-78页 |
| 4.4.1 脂肪酶基因aol的克隆 | 第72-74页 |
| 4.4.2 米曲霉脂肪酶AOL的结构分析 | 第74-76页 |
| 4.4.3 米曲霉脂肪酶AOL的E. coli异源表达与纯化 | 第76-78页 |
| 4.5 本章小结 | 第78-79页 |
| 第五章 米曲霉WZ007细胞催化合成维生素A中间体的研究 | 第79-98页 |
| 5.1 引言 | 第79-80页 |
| 5.2 实验材料 | 第80-81页 |
| 5.2.1 菌株 | 第80页 |
| 5.2.2 培养基 | 第80页 |
| 5.2.3 试剂与材料 | 第80页 |
| 5.2.4 主要仪器 | 第80-81页 |
| 5.3 实验方法 | 第81-83页 |
| 5.3.1 米曲霉WZ007的培养 | 第81页 |
| 5.3.2 米曲霉冻干细胞的制备 | 第81页 |
| 5.3.3 酶催化维生素A中间体二醇单乙酰化的反应条件 | 第81-82页 |
| 5.3.4 酶催化底物和产物的液相检测方法 | 第82页 |
| 5.3.5 酶催化反应转化率和区域选择性的计算方法 | 第82页 |
| 5.3.6 酶催化产物的气相质谱和核磁检测 | 第82-83页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第83-97页 |
| 5.4.1 液相色谱检测标准曲线的建立 | 第83-84页 |
| 5.4.2 脂肪酶的筛选 | 第84-85页 |
| 5.4.3 脂肪酶催化区域选择性乙酰化的条件研究 | 第85-94页 |
| 5.4.4 米曲霉脂肪酶细胞的操作稳定性 | 第94-95页 |
| 5.4.5 酶催化反应的时间曲线 | 第95-96页 |
| 5.4.6 酶催化产物的结构鉴定 | 第96-97页 |
| 5.5 本章小结 | 第97-98页 |
| 第六章 结论与展望 | 第98-101页 |
| 6.1 结论 | 第98-100页 |
| 6.2 创新点 | 第100页 |
| 6.3 展望 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-117页 |
| 附录 | 第117-120页 |
| 攻读博士期间发表论文与申请专利 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
