| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第13-29页 |
| 1.1 琥珀酸 | 第13-14页 |
| 1.2 琥珀酸合成途径 | 第14-20页 |
| 1.3 CO_2溶解过程 | 第20-21页 |
| 1.4 CO_2跨膜转运及胞内转化过程 | 第21-22页 |
| 1.5 CO_2固定过程 | 第22-25页 |
| 1.5.1 CO_2固定酶 | 第22-24页 |
| 1.5.2 多个CO_2固定酶的组合调控 | 第24-25页 |
| 1.6 协同调控策略 | 第25-26页 |
| 1.6.1 与CO_2供给的协同调控 | 第25页 |
| 1.6.2 与还原力供给的协同调控 | 第25-26页 |
| 1.7 转录调控 | 第26-27页 |
| 1.8 研究的内容及意义 | 第27-29页 |
| 1.8.1 CO_2固定及转运基因单独表达对琥珀酸合成的影响 | 第27-28页 |
| 1.8.2 CO_2转运与固定的组合代谢调控 | 第28页 |
| 1.8.3 全局转录因子Cra的突变对琥珀酸合成的影响 | 第28页 |
| 1.8.4 人工构建的嵌合体Cra对琥珀酸合成过程的影响 | 第28-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-39页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第29-34页 |
| 2.1.2 引物 | 第34-39页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第39页 |
| 2.1.4 培养基 | 第39页 |
| 2.2 分子克隆 | 第39-48页 |
| 2.2.1 培养条件 | 第39-40页 |
| 2.2.2 分子克隆 | 第40-44页 |
| 2.2.3 基因相对表达水平检测 | 第44-46页 |
| 2.2.4 酶活检测 | 第46-47页 |
| 2.2.5 发酵产物检测 | 第47-48页 |
| 第三章 CO_2固定及转运基因单独表达对琥珀酸合成的影响 | 第48-60页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 固定基因表达质粒的构建 | 第48-51页 |
| 3.3 CO_2固定基因的表达对琥珀酸发酵过程的影响 | 第51-55页 |
| 3.3.1 CO_2固定基因的表达对细胞生长的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.2 CO_2固定基因的表达对糖消耗的影响 | 第52页 |
| 3.3.3 CO_2转运基因的表达对琥珀酸合成的影响 | 第52-54页 |
| 3.3.4 CO_2固定基因的表达对ppc和pck转录水平的影响 | 第54页 |
| 3.3.5 CO_2固定基因的表达对PPC和PCK酶活的影响 | 第54-55页 |
| 3.4 CO_2转运基因的表达对琥珀酸发酵过程的影响 | 第55-59页 |
| 3.4.1 CO_2转运基因的表达对细胞生长的影响 | 第55页 |
| 3.4.2 CO_2转运基因的表达对糖消耗的影响 | 第55-57页 |
| 3.4.3 CO_2转运基因的表达对琥珀酸合成的影响 | 第57页 |
| 3.4.4 CO_2转运基因的表达对基因转录水平的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.5 CO_2转运基因的表达对PPC和PCK酶活的影响 | 第58-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 CO_2转运与固定的组合代谢调控 | 第60-70页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 CO_2多转运与多固定基因的表达对琥珀酸发酵过程的影响 | 第60-65页 |
| 4.2.1 CO_2多转运与多固定基因对细胞生长的影响 | 第60页 |
| 4.2.2 CO_2多转运与多固定基因对糖消耗的影响 | 第60-61页 |
| 4.2.3 CO_2多转运与多固定基因对琥珀酸合成的影响 | 第61-63页 |
| 4.2.4 CO_2多转运与多固定基因对基因转录水平的影响 | 第63-64页 |
| 4.2.5 CO_2多转运与多固定基因对PPC和PCK酶活的影响 | 第64-65页 |
| 4.3 CO_2单转运与单固定基因的表达对琥珀酸发酵过程的影响 | 第65-69页 |
| 4.3.1 CO_2单转运与单固定基因对细胞生长的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.2 CO_2单转运与单固定基因对糖消耗的影响 | 第66页 |
| 4.3.3 CO_2单转运与单固定基因对琥珀酸合成的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.4 CO_2单转运与单固定基因对基因转录水平的影响 | 第67-69页 |
| 4.3.5 CO_2单转运与单固定基因对PPC和PCK酶活的影响 | 第69页 |
| 4.4 小结 | 第69-70页 |
| 第五章 全局转录因子Cra突变对琥珀酸合成的影响 | 第70-79页 |
| 5.1 引言 | 第70-71页 |
| 5.2 Cra的定点突变 | 第71-74页 |
| 5.2.1 方案设计 | 第71-72页 |
| 5.2.2 突变点左右两端基因片段的扩增 | 第72-74页 |
| 5.3 突变菌株的厌氧瓶发酵初筛 | 第74-75页 |
| 5.4 突变菌株的反应器发酵复筛 | 第75-78页 |
| 5.4.1 Cra连接域的突变对细胞生长的影响 | 第75-76页 |
| 5.4.2 Cra连接域的突变对糖消耗的影响 | 第76-77页 |
| 5.4.3 Cra连接域的突变对琥珀酸合成的影响 | 第77-78页 |
| 5.5 小结 | 第78-79页 |
| 第六章 人工构建的嵌合体Cra对琥珀酸合成过程的影响 | 第79-94页 |
| 6.1 引言 | 第79页 |
| 6.2 嵌合体Cra的构建 | 第79-87页 |
| 6.2.1 方案设计 | 第79-81页 |
| 6.2.2 拼接点两端片段的扩增 | 第81-83页 |
| 6.2.3 代谢网络的构建 | 第83-87页 |
| 6.3 嵌合体Cra突变菌株的厌氧瓶发酵初筛 | 第87-88页 |
| 6.4 嵌合体Cra突变菌株的反应器发酵复筛 | 第88-92页 |
| 6.4.1 嵌合体Cra对细胞生长的影响 | 第88-89页 |
| 6.4.2 嵌合体Cra对糖消耗的影响 | 第89-90页 |
| 6.4.3 嵌合体Cra对琥珀酸合成的影响 | 第90页 |
| 6.4.4 嵌合体FFhR对代谢通量的影响 | 第90-92页 |
| 6.5 小结 | 第92-94页 |
| 第七章 研究结论与展望 | 第94-96页 |
| 7.1 研究结论 | 第94页 |
| 7.2 研究展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 攻读博士期间发表的科研成果 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
