| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 植物中磷的重要性以及通过生物学方法提高磷效率意义 | 第10页 |
| 1.2 拟南芥低磷胁迫下的适应性机制 | 第10-12页 |
| 1.2.1 根系形态的变化 | 第10-11页 |
| 1.2.2 根系分泌物的适应性变化 | 第11-12页 |
| 1.2.3 植物体内磷的转移和利用 | 第12页 |
| 1.3 植物的磷代谢网络 | 第12-13页 |
| 1.3.1 低磷胁迫下的脂类代谢 | 第12页 |
| 1.3.2 低磷胁迫下的旁路代谢 | 第12-13页 |
| 1.4 植物中磷响应信号的感知及传递通路 | 第13-15页 |
| 1.4.1 植物中的磷信号感知系统 | 第13-14页 |
| 1.4.2 植物中的磷信号传递系统 | 第14-15页 |
| 1.5 转录因子对拟南芥低磷胁迫的调控 | 第15-17页 |
| 1.5.1 转录因子及其功能 | 第15-16页 |
| 1.5.2 转录因子功能研究的方法 | 第16-17页 |
| 1.6 拟南芥低磷胁迫转录因子研究进展 | 第17-19页 |
| 1.6.1 拟南芥转录因子分类 | 第17页 |
| 1.6.2 植物磷调控转录因子研究进展 | 第17-19页 |
| 1.7 本文研究目的意义 | 第19-20页 |
| 1.8 研究内容和技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 候选磷调控转录因子的表达分析 | 第21-30页 |
| 2.1 材料、试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 实验准备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 拟南芥的消毒及水培方法 | 第23页 |
| 2.2.3 拟南芥RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.4 拟南芥RNA样品的纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.5 反转录cDNA第一链 | 第25页 |
| 2.2.6 低磷响应基因在全磷和缺磷培养条件下的表达分析 | 第25-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-29页 |
| 2.3.1 拟南芥RNA的提取 | 第27页 |
| 2.3.2 反转录cDNA的检测 | 第27-28页 |
| 2.3.3 目的基因缺磷处理下的表达分析 | 第28-29页 |
| 2.4 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 候选基因过量表达拟南芥植株的获得 | 第30-40页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第30页 |
| 3.1.1 试剂 | 第30页 |
| 3.1.2 载体 | 第30页 |
| 3.1.3 材料 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-34页 |
| 3.2.1 拟南芥总RNA的提取及cDNA的合成 | 第30页 |
| 3.2.2 全长克隆 | 第30-31页 |
| 3.2.3 目的基因的回收和纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.4 目的基因与pMD-18T载体连接 | 第32页 |
| 3.2.5 感受态细胞的制备及转化 | 第32页 |
| 3.2.6 连接产物的转化与鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.7 阳性克隆的菌落PCR鉴定体系: | 第33页 |
| 3.2.8 质粒提取 | 第33-34页 |
| 3.2.9 质粒PCR鉴定 | 第34页 |
| 3.2.10 质粒提取及重组质粒鉴定 | 第34页 |
| 3.3 农杆菌侵染法转化拟南芥 | 第34-35页 |
| 3.3.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 3.3.2 重组载体转入农杆菌及阳性克隆鉴定 | 第35页 |
| 3.3.3 农杆菌侵染拟南芥 | 第35页 |
| 3.4 转基因株系的检测 | 第35-36页 |
| 3.4.1 拟南芥基因组DNA提取 | 第35页 |
| 3.4.2 过表达转基因拟南芥的检测 | 第35-36页 |
| 3.5 结果 | 第36-39页 |
| 3.5.1 植物过表达载体的构建及转化农杆菌 | 第36-37页 |
| 3.5.2 过表达植株的筛选与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.6 结论 | 第39-40页 |
| 第四章 候选基因突变体的分析 | 第40-51页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第40页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 拟南芥种子消毒方法 | 第40页 |
| 4.2.2 拟南芥水培方法 | 第40页 |
| 4.2.3 T-DNA插入纯合体鉴定 | 第40-41页 |
| 4.2.4 根长的测定方法 | 第41页 |
| 4.2.5 根冠比测定方法 | 第41页 |
| 4.2.6 根际酸性磷酸酶活性的测定方法 | 第41-42页 |
| 4.2.7 花色素苷含量的测定方法 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-47页 |
| 4.3.1 实验拟南芥的水培 | 第42-43页 |
| 4.3.2 转基因株系基因表达的qRT-PCR分析 | 第43页 |
| 4.3.3 过表达转基因株系的表型的鉴定 | 第43页 |
| 4.3.4 Salk突变体的纯合子鉴定结果 | 第43-44页 |
| 4.3.5 根长测定结果 | 第44-45页 |
| 4.3.6 根冠比测定结果 | 第45页 |
| 4.3.7 突变体与野生型拟南芥中根系酸性磷酸酶活性分析 | 第45-46页 |
| 4.3.8 花色素苷含量测定结果 | 第46-47页 |
| 4.4 小结 | 第47页 |
| 4.5 结论与讨论 | 第47-51页 |
| 第五章 转录因子的原核表达 | 第51-59页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第51-53页 |
| 5.1.1 菌株与载体 | 第51页 |
| 5.1.2 酶和其它试剂 | 第51页 |
| 5.1.3 主要溶液的配制 | 第51-52页 |
| 5.1.4 PCR引物 | 第52页 |
| 5.1.5 原核表达产物的SDS-PAGE电泳分析 | 第52-53页 |
| 5.2 原核表达载体的构建 | 第53页 |
| 5.3 蛋白的诱导表达 | 第53页 |
| 5.4 蛋白表达的结果 | 第53-58页 |
| 5.4.1 原核表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 5.4.2 原核蛋白诱导表达及可溶性鉴定 | 第55-58页 |
| 5.5 原核蛋白表达的分析与讨论 | 第58-59页 |
| ABSTRACT | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
