| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-17页 |
| 1.1 DisA | 第9-10页 |
| 1.2 c-di-AMP | 第10-12页 |
| 1.3 蛋白表达 | 第12-17页 |
| 1.3.1 丙酸诱导表达系统 | 第12-13页 |
| 1.3.2 载体上标签和位点 | 第13-17页 |
| 1.3.2.1 多聚组氨酸标签 | 第13页 |
| 1.3.2.2 Grifin标签 | 第13页 |
| 1.3.2.3 GST标签 | 第13-14页 |
| 1.3.2.4 MBP标签 | 第14页 |
| 1.3.2.5 NusA标签 | 第14页 |
| 1.3.2.6 SUMO标签 | 第14页 |
| 1.3.2.7 Thioredoxin标签 | 第14-15页 |
| 1.3.2.8 proteinG标签 | 第15页 |
| 1.3.2.9 γ-crystallin标签 | 第15页 |
| 1.3.2.10 ArsC标签 | 第15页 |
| 1.3.2.11 PpiB标签 | 第15页 |
| 1.3.2.12 TEV标签 | 第15页 |
| 1.3.2.13 LIC位点 | 第15-17页 |
| 2 引言 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-24页 |
| 3.1 材料 | 第18-21页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第18页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第18页 |
| 3.1.3 试剂 | 第18-21页 |
| 3.1.3.1 主要试剂 | 第18-19页 |
| 3.1.3.2 常规试剂及配制 | 第19-21页 |
| 3.2 方法 | 第21-24页 |
| 3.2.1 DisA基因的克隆 | 第21页 |
| 3.2.1.1 引物设计与合成 | 第21页 |
| 3.2.1.2 PCR扩增 | 第21页 |
| 3.2.2 载体SspI单酶切 | 第21-22页 |
| 3.2.3 构建重组质粒 | 第22页 |
| 3.2.4 菌液PCR鉴定 | 第22页 |
| 3.2.5 重组质粒的酶切鉴定 | 第22-23页 |
| 3.2.5.1 重组质粒EcoR Ⅰ单酶切鉴定 | 第22-23页 |
| 3.2.5.2 重组质粒EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定 | 第23页 |
| 3.2.6 重组质粒的测序鉴定 | 第23页 |
| 3.2.7 重组质粒的诱导表达及鉴定 | 第23页 |
| 3.2.7.1 诱导表达 | 第23页 |
| 3.2.7.2 SDS-PAGE鉴定 | 第23页 |
| 3.2.8 上清中蛋白的检测 | 第23-24页 |
| 3.2.8.1 大量诱导表达 | 第24页 |
| 3.2.8.2 上清蛋白SDS-PAGE电泳检测 | 第24页 |
| 3.2.8.3 上清蛋白Western blotting检测 | 第24页 |
| 4 结果与分析 | 第24-29页 |
| 4.1 DisA基因的PCR扩增 | 第25页 |
| 4.2 重组质粒的构建与鉴定 | 第25-26页 |
| 4.2.1 重组质粒的构建 | 第25-26页 |
| 4.2.2 菌液PCR鉴定 | 第26页 |
| 4.2.3 酶切鉴定 | 第26页 |
| 4.2.4 测序鉴定 | 第26页 |
| 4.3 DisA基因在大肠杆菌中的表达 | 第26-27页 |
| 4.4 上清中六种重组蛋白的检测 | 第27-29页 |
| 4.4.1 上清液中蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第27页 |
| 4.4.2 六种重组蛋白在上清液中的Western blotting检测结果 | 第27-29页 |
| 5 讨论与结论 | 第29-31页 |
| 5.1 讨论 | 第29-30页 |
| 5.2 结论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-38页 |
| 英文摘要 | 第38页 |
