中文摘要 | 第4-6页 |
abstract | 第6-7页 |
第一章 前言 | 第10-14页 |
第二章 实验材料和方法 | 第14-33页 |
2.1 实验材料 | 第14-21页 |
2.1.1 细胞系 | 第14页 |
2.1.2 质粒 | 第14页 |
2.1.3 常用细胞生物学试剂 | 第14-15页 |
2.1.4 分子克隆及qPCR试剂 | 第15页 |
2.1.5 Western Blotting试剂 | 第15-16页 |
2.1.6 蛋白纯化试剂 | 第16页 |
2.1.7 主要抗体 | 第16-17页 |
2.1.8 主要仪器 | 第17-18页 |
2.1.9 主要试剂配方 | 第18-21页 |
2.2 实验操作及方法 | 第21-33页 |
2.2.1 总RNA提取 | 第21页 |
2.2.2 单链cDNA合成 | 第21-22页 |
2.2.3 基因片段扩增和质粒重组 | 第22-25页 |
2.2.4 细胞培养 | 第25页 |
2.2.5 细胞转染 | 第25-26页 |
2.2.6 蛋白纯化 | 第26-27页 |
2.2.7 免疫印迹 | 第27-29页 |
2.2.8 放线菌酮CHX处理 | 第29页 |
2.2.9 蛋白酶体抑制剂MG132处理 | 第29页 |
2.2.10 qPCR | 第29-30页 |
2.2.11 双荧光报告基因检测 | 第30-31页 |
2.2.12 免疫荧光共定位 | 第31页 |
2.2.13 生物节律测定 | 第31-32页 |
2.2.14 实验数据处理分析 | 第32-33页 |
第三章 实验结果与讨论 | 第33-50页 |
3.1 蛋白质组学方法鉴定BMAL1相互作用蛋白UBE2O | 第33-34页 |
3.2 生化验证UBE2O与BMAL1相互作用 | 第34-35页 |
3.3 UBE2O下调内源性BMAL1蛋白水平 | 第35-38页 |
3.4 UBE2O促进BMAL1泛素化降解 | 第38-39页 |
3.5 UBE2O降低BMAL1稳定性 | 第39-40页 |
3.6 UBE2O对RRE-BOX和E-BOX转录的影响 | 第40-42页 |
3.7 QPCR检测UBE2O对其他钟基因转录水平的影响 | 第42-43页 |
3.8 UBE2O截短体对BMAL1稳定性的影响 | 第43-45页 |
3.9 免疫荧光检测BMAL1与UBE2O及D1的共定位 | 第45-46页 |
3.10 UBE2O敲低对生物节律的影响 | 第46-47页 |
3.11 结论与讨论 | 第47-50页 |
参考文献 | 第50-55页 |
综述 | 第55-62页 |
参考文献 | 第59-62页 |
中英文缩略词对照表 | 第62-63页 |
攻读硕士学位期间发表的论文 | 第63-64页 |
致谢 | 第64-65页 |