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泛素结合酶UBE2O通过促进BMAL1的泛素化降解调控生物节律的机制研究

中文摘要第4-6页
abstract第6-7页
第一章 前言第10-14页
第二章 实验材料和方法第14-33页
    2.1 实验材料第14-21页
        2.1.1 细胞系第14页
        2.1.2 质粒第14页
        2.1.3 常用细胞生物学试剂第14-15页
        2.1.4 分子克隆及qPCR试剂第15页
        2.1.5 Western Blotting试剂第15-16页
        2.1.6 蛋白纯化试剂第16页
        2.1.7 主要抗体第16-17页
        2.1.8 主要仪器第17-18页
        2.1.9 主要试剂配方第18-21页
    2.2 实验操作及方法第21-33页
        2.2.1 总RNA提取第21页
        2.2.2 单链cDNA合成第21-22页
        2.2.3 基因片段扩增和质粒重组第22-25页
        2.2.4 细胞培养第25页
        2.2.5 细胞转染第25-26页
        2.2.6 蛋白纯化第26-27页
        2.2.7 免疫印迹第27-29页
        2.2.8 放线菌酮CHX处理第29页
        2.2.9 蛋白酶体抑制剂MG132处理第29页
        2.2.10 qPCR第29-30页
        2.2.11 双荧光报告基因检测第30-31页
        2.2.12 免疫荧光共定位第31页
        2.2.13 生物节律测定第31-32页
        2.2.14 实验数据处理分析第32-33页
第三章 实验结果与讨论第33-50页
    3.1 蛋白质组学方法鉴定BMAL1相互作用蛋白UBE2O第33-34页
    3.2 生化验证UBE2O与BMAL1相互作用第34-35页
    3.3 UBE2O下调内源性BMAL1蛋白水平第35-38页
    3.4 UBE2O促进BMAL1泛素化降解第38-39页
    3.5 UBE2O降低BMAL1稳定性第39-40页
    3.6 UBE2O对RRE-BOX和E-BOX转录的影响第40-42页
    3.7 QPCR检测UBE2O对其他钟基因转录水平的影响第42-43页
    3.8 UBE2O截短体对BMAL1稳定性的影响第43-45页
    3.9 免疫荧光检测BMAL1与UBE2O及D1的共定位第45-46页
    3.10 UBE2O敲低对生物节律的影响第46-47页
    3.11 结论与讨论第47-50页
参考文献第50-55页
综述第55-62页
    参考文献第59-62页
中英文缩略词对照表第62-63页
攻读硕士学位期间发表的论文第63-64页
致谢第64-65页

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