| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 生物丁醇 | 第11页 |
| 1.1.1 丁醇的性质及应用 | 第11页 |
| 1.1.2 丁醇的制法 | 第11页 |
| 1.2 丁醇发酵底物 | 第11-13页 |
| 1.2.1 葡萄糖基物料 | 第12页 |
| 1.2.2 木糖基物料 | 第12页 |
| 1.2.3 果糖基物料 | 第12-13页 |
| 1.3 丙酮丁醇梭状芽孢杆菌的糖转运系统 | 第13-16页 |
| 1.3.1 PTS系统的糖转运 | 第13-16页 |
| 1.3.2 非PTS系统的糖转运 | 第16页 |
| 1.4 丙酮丁醇梭状芽孢杆菌的代谢途径及相关酶 | 第16-21页 |
| 1.4.1 糖酵解途径 | 第16-18页 |
| 1.4.2 产酸期 | 第18页 |
| 1.4.3 产溶剂期 | 第18页 |
| 1.4.4 产酸期到产溶剂期的转变 | 第18-19页 |
| 1.4.5 代谢过程中的关键酶 | 第19-21页 |
| 1.5 生物丁醇发酵的研究 | 第21-24页 |
| 1.5.1 代谢调控 | 第21-22页 |
| 1.5.2 菌株改造 | 第22-23页 |
| 1.5.3 丁醇分离技术 | 第23-24页 |
| 1.6 课题的目的及意义 | 第24-25页 |
| 2 敲除和过表达基因工程菌株构建 | 第25-48页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料 | 第25-28页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.2 试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 培养基及所用抗生素 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-43页 |
| 2.3.1 质粒提取、PCR产物纯化以及切胶回收 | 第28-30页 |
| 2.3.2 E.coli DH5α 感受态细胞制备与转化 | 第30-31页 |
| 2.3.3 丙酮丁醇梭状芽孢杆菌基因组提取 | 第31页 |
| 2.3.4 梭菌的电转与保藏 | 第31-32页 |
| 2.3.5 敲除菌株的构建 | 第32-38页 |
| 2.3.6 过表达菌株构建 | 第38-43页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第43-47页 |
| 2.4.1 敲除菌株构建验证 | 第43-44页 |
| 2.4.2 过表达菌株构建验证 | 第44-46页 |
| 2.4.3 空载菌株构建验证 | 第46-47页 |
| 2.4.4 遗传稳定性验证 | 第47页 |
| 2.5 小结 | 第47-48页 |
| 3 基因工程菌株发酵动力学 | 第48-72页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第48-49页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第48页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第48-49页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 3.3.1 培养基 | 第49-50页 |
| 3.3.2 培养方法 | 第50页 |
| 3.3.3 菊芋物料的处理 | 第50页 |
| 3.3.4 样品分析方法 | 第50-51页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第51-71页 |
| 3.4.1 敲除菌株的发酵 | 第51-58页 |
| 3.4.2 空载菌株发酵 | 第58-59页 |
| 3.4.3 过表达菌株发酵 | 第59-71页 |
| 3.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 4 发酵液的丁醇分离 | 第72-79页 |
| 4.1 引言 | 第72页 |
| 4.2 实验材料 | 第72-73页 |
| 4.2.1 原料液 | 第72页 |
| 4.2.2 主要实验试剂 | 第72页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第72-73页 |
| 4.3 实验方法 | 第73-74页 |
| 4.3.1 PDMS膜制备 | 第73页 |
| 4.3.2 渗透汽化实验 | 第73-74页 |
| 4.3.3 测定与分析方法 | 第74页 |
| 4.4 结果与分析 | 第74-77页 |
| 4.4.1 混合糖发酵液的丁醇分离 | 第74-75页 |
| 4.4.2 菊芋物料发酵液的丁醇分离 | 第75-77页 |
| 4.5 本章小结 | 第77-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 附录A cac0231基因序列 | 第85-86页 |
| 附录B cac0232基因序列 | 第86-87页 |
| 附录C thl启动子基因序列 | 第87-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |