| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 序言 | 第10-22页 |
| 1 我国巴西橡胶树产业的经济重要性 | 第10页 |
| 2 巴西橡胶树棒孢霉落叶病研究进展 | 第10-13页 |
| 2.1 分布与为害 | 第10-11页 |
| 2.2 症状特点 | 第11页 |
| 2.3 病原菌 | 第11-12页 |
| 2.4 发病规律 | 第12页 |
| 2.5 防治技术 | 第12-13页 |
| 2.5.1 种植抗病品种 | 第12页 |
| 2.5.2 化学防治 | 第12-13页 |
| 2.5.3 其他防治措施 | 第13页 |
| 3 多主棒孢菌的研究概况 | 第13-16页 |
| 3.1 分子检测 | 第13-14页 |
| 3.2 分子遗传多样性 | 第14页 |
| 3.3 致病机理 | 第14-15页 |
| 3.4 相关致病基因的研究 | 第15-16页 |
| 4 蛋白激酶(MAPK)基因研究进展 | 第16-20页 |
| 4.1 真菌MAPK基因的种类与功能 | 第16-19页 |
| 4.1.1 参与调控环境胁迫反应 | 第16-17页 |
| 4.1.2 参与调控有性交配 | 第17页 |
| 4.1.3 参与调控菌丝和孢子生长发育 | 第17-18页 |
| 4.1.4 参与调控病菌的致病性 | 第18-19页 |
| 4.2 植物病原真菌MAPK基因的研究发展前景 | 第19-20页 |
| 5 本研究目的意义、主要研究内容和技术路线 | 第20-22页 |
| 5.1 目的意义 | 第20页 |
| 5.2 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 5.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-37页 |
| 1 材料与仪器 | 第22-23页 |
| 1.1 供试药剂及试剂 | 第22页 |
| 1.2 仪器设备 | 第22页 |
| 1.3 供试菌株及质粒 | 第22-23页 |
| 1.4 供试品种 | 第23页 |
| 1.5 供试培养基 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-37页 |
| 2.1 ΔCCK1突变体的互补载体构建 | 第23-28页 |
| 2.1.1 病原菌基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.1.2 CCK1基因5’端C5片段和3’端C3片段的扩增 | 第24-26页 |
| 2.1.3 Basta抗性基因Bar的扩增 | 第26-27页 |
| 2.1.4 连接片段的扩增与回收 | 第27页 |
| 2.1.5 互补载体pΔCCK1-C的生成 | 第27-28页 |
| 2.2 ΔCCK1突变体互补转化子的制备 | 第28-30页 |
| 2.2.1 CC004和FHB4菌株对Basta的敏感性测定 | 第28页 |
| 2.2.2 ΔCCK1突变体原生质体制备 | 第28-29页 |
| 2.2.3 原生质体的转化与再生 | 第29-30页 |
| 2.3 ΔCCK1突变体互补转化子的筛选与PCR验证 | 第30-31页 |
| 2.3.1 互补转化子的纯化 | 第30页 |
| 2.3.2 用鉴定多主棒孢菌的特异性引物扩增鉴定互补转化子 | 第30页 |
| 2.3.3 用特异性引物扩增验证ΔCCK1突变体互补转化子 | 第30-31页 |
| 2.4 半定量RT-PCR分析ΔCCK1突变体回复株CBB3中的CCK1基因表达 | 第31-33页 |
| 2.4.1 菌丝总RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.4.2 反转录合成cDNA | 第32页 |
| 2.4.3 回复株CBB3中的CCK1基因半定量RT-PCR分析 | 第32-33页 |
| 2.5 ΔCCK1回复株的表型测定 | 第33-36页 |
| 2.5.1 ΔCCK1回复株对Basta抗性的遗传稳定性 | 第33页 |
| 2.5.2 △CCK1回复株菌落、菌丝的形态观察和生长速率的测定 | 第33页 |
| 2.5.3 ΔCCK1回复株产孢情况观察 | 第33-34页 |
| 2.5.4 ΔCCK1回复株菌丝致死温度的测定 | 第34页 |
| 2.5.5 ΔCCK1回复株对pH的敏感性测定 | 第34页 |
| 2.5.6 ΔCCK1回复株对高渗胁迫条件的敏感性测定 | 第34页 |
| 2.5.7 ΔCCK1回复株的致病力测定 | 第34-35页 |
| 2.5.8 ΔCCK1回复株的产酶活性测定 | 第35-36页 |
| 2.6 CCK1途径与其他信号转导途径的关系 | 第36-37页 |
| 2.6.1 CCK1途径与钙信号途径的关系 | 第36页 |
| 2.6.2 CCE1途径与cAMP途径的关系 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-54页 |
| 1 ΔCCK1突变体的互补载体构建 | 第37-38页 |
| 1.1 巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌CC004基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 1.2 CCK1基因5’端C5片段、3’端C3片段和Basta抗性基因Bar的扩增 | 第37页 |
| 1.3 ΔCCK1突变体互补载体pΔCCK1-C的生成 | 第37-38页 |
| 2 ΔCCKl突变体互补转化子的获得 | 第38-39页 |
| 2.1 野生菌株CC004及其ΔCCK1突变株FHB4对Basta的敏感性测定 | 第38页 |
| 2.2 互补片段的扩增 | 第38-39页 |
| 2.3 ΔCCK1突变体的互补 | 第39页 |
| 3 ΔCCK1互补突变体的筛选与PCR验证 | 第39-41页 |
| 3.1 用鉴定多主棒孢菌的特异性引物扩增鉴定转化子 | 第39页 |
| 3.2 用特异性引物扩增验证互补转化子 | 第39-41页 |
| 4 ΔCCK1突变体回复株CBB3的半定量RT-PCR分析 | 第41-42页 |
| 4.1 菌株cDNA模板的获得 | 第41页 |
| 4.2 扩增循环数的确定 | 第41页 |
| 4.3 回复株CBB3中的CCK1基因半定量RT-PCR分析 | 第41-42页 |
| 5 ΔCCK1突变体回复菌株CBB3的表型测定 | 第42-52页 |
| 5.1 ΔCCK1回复株CBB3对Basta抗性的遗传稳定性检测 | 第42页 |
| 5.2 ΔCCK1回复株CBB3菌落、菌丝形态、产孢情况观察和生长速率测定 | 第42-44页 |
| 5.3 ΔCCK1回复株CBB3菌丝致死温度的测定 | 第44页 |
| 5.4 ΔCCK1回复株CBB3对pH条件的敏感性测定 | 第44-45页 |
| 5.5 ΔCCK1回复菌株CBB3对高渗胁迫条件敏感性的测定 | 第45-47页 |
| 5.6 ΔCCK1突变体回复菌株CBB3致病性的测定 | 第47-49页 |
| 5.6.1 菌饼致病性测定 | 第47-48页 |
| 5.6.2. 毒素致病性测定 | 第48-49页 |
| 5.7 ΔCCK1突变体回复菌株CBB3漆酶相对产量的测定 | 第49-50页 |
| 5.8 ΔCCK1回复株CBB3细胞壁降解酶活性的测定 | 第50-52页 |
| 5.8.1 葡萄糖和半乳糖的标准曲线制作 | 第50-51页 |
| 5.8.2 纤维素酶的活性测定 | 第51页 |
| 5.8.3 果胶酶活性测定 | 第51-52页 |
| 6 CCK1途径与其他信号转导途径的关系初探 | 第52-54页 |
| 6.1 CCK1途径与钙信号途径间的关系 | 第52-53页 |
| 6.2 CCK1途径与cAMP途径间的关系 | 第53-54页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第54-59页 |
| 1 主要结论 | 第54-55页 |
| 1.1 获得巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌ΔCCK1突变体的互补载体 | 第54页 |
| 1.2 获得巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌ΔCCK1突变体的回复菌株 | 第54页 |
| 1.3 巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌ΔCCKl回复株CBB3的表型 | 第54-55页 |
| 1.4 CCK1途径与其他信号转导途径的关系初探 | 第55页 |
| 2 讨论 | 第55-58页 |
| 2.1 CCK1基因互补载体的构建 | 第55-56页 |
| 2.2 蛋白激酶CCK1基因的表型验证分析 | 第56-57页 |
| 2.3 蛋白激酶CCK1突变体的致病性分析 | 第57页 |
| 2.4 CCK1蛋白激酶调控途径与其他调控途径的关系 | 第57-58页 |
| 2.5 突变体纯化条件的改进 | 第58页 |
| 3 本研究创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 缩略词表 | 第67-68页 |
| 附录1 | 第68-71页 |
| 附录2 | 第71-72页 |
| 附录3 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
