| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-37页 |
| 1.1 热激蛋白Hsp70 | 第16-27页 |
| 1.1.1 Hsp70家族的分布和特征 | 第16-19页 |
| 1.1.2 Hsp70蛋白的生理功能 | 第19-21页 |
| 1.1.3 Hsp70系统的作用机制 | 第21-24页 |
| 1.1.4 hsp70基因的表达调控 | 第24-27页 |
| 1.2 嗜盐古生菌 | 第27-33页 |
| 1.2.1 嗜盐古生菌概述 | 第27-28页 |
| 1.2.2 嗜盐古生菌的生物学特征 | 第28-29页 |
| 1.2.3 嗜盐古生菌中基因的表达 | 第29-33页 |
| 1.2.3.1 嗜盐古生菌中基因的转录 | 第29-30页 |
| 1.2.3.2 嗜盐古生菌中基因的翻译 | 第30-33页 |
| 1.3 古生菌Hsp70的研究进展 | 第33-36页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-65页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-53页 |
| 2.1.1 菌株及其特点 | 第37-38页 |
| 2.1.2 质粒及其特点 | 第38-42页 |
| 2.1.3 PCR引物序列及其用途 | 第42-49页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第49页 |
| 2.1.5 药品和试剂 | 第49-50页 |
| 2.1.6 溶液的配置 | 第50-52页 |
| 2.1.7 培养基配方 | 第52-53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-65页 |
| 2.2.1 一步法提取质粒 | 第53页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第53-54页 |
| 2.2.3 大肠杆菌的转化 | 第54页 |
| 2.2.4 嗜盐古生菌的转化 | 第54-55页 |
| 2.2.5 嗜盐古生菌总DNA的提取 | 第55页 |
| 2.2.6 质粒DNA序列中碱基的定点突变 | 第55-56页 |
| 2.2.7 蛋白质浓度的测定 | 第56-57页 |
| 2.2.8 β-半乳糖苷酶酶比活的测定 | 第57页 |
| 2.2.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第57-59页 |
| 2.2.10 蛋白质印迹 | 第59页 |
| 2.2.11 嗜盐古生菌总RNA的提取 | 第59-60页 |
| 2.2.12 嗜盐古生菌总RNA的反转录 | 第60页 |
| 2.2.13 Real-time PCR | 第60-61页 |
| 2.2.14 X-gal显色 | 第61页 |
| 2.2.15 分子进化系统发育树分析 | 第61页 |
| 2.2.16 检测高温和低渗刺激对hsp70和hsp40基因表达的影响 | 第61-62页 |
| 2.2.17 检测温度或者盐浓度对菌株在固体培养基上生长的影响 | 第62页 |
| 2.2.18 检测高温和低渗刺激对敲除菌株存活率的影响 | 第62-63页 |
| 2.2.19 检测氧压对于菌株生长的影响 | 第63页 |
| 2.2.20 检测紫外线照射对于菌株存活率的影响 | 第63页 |
| 2.2.21 嗜盐古生菌代时测定 | 第63-64页 |
| 2.2.22 质粒稳定性实验 | 第64-65页 |
| 第三章 嗜盐古生菌hsp70基因表达的研究 | 第65-90页 |
| 3.1 实验结果与分析 | 第66-87页 |
| 3.1.1 嗜盐古生菌中hsp70基因的序列分析 | 第66-67页 |
| 3.1.2 hsp70基因起始密码子的突变 | 第67-74页 |
| 3.1.3 -3和+4位点的碱基突变 | 第74-80页 |
| 3.1.3.1 Natrinema sp.J7菌hsp70启动子 | 第74-76页 |
| 3.1.3.2 Hbt.salinarum NRC-1和Hfx.volcanii DS70菌hsp70启动子 | 第76-80页 |
| 3.1.4 5’-UTR中碱基的突变 | 第80-82页 |
| 3.1.5 第二个氨基酸密码子的碱基突变 | 第82-84页 |
| 3.1.6 5’-UTR上游碱基突变对于基因表达的影响 | 第84-85页 |
| 3.1.7 嗜盐古生菌16S rDNA分子进化系统发育树 | 第85-87页 |
| 3.2 讨论 | 第87-89页 |
| 3.3 小结 | 第89-90页 |
| 第四章 Hfx.volcanii Hsp70系统功能的研究 | 第90-123页 |
| 4.1 实验结果与分析 | 第90-120页 |
| 4.1.1 高温和低渗刺激对hsp70和hsp40基因表达的影响 | 第90-91页 |
| 4.1.2 Hsp70系统三个基因的敲除 | 第91-94页 |
| 4.1.2.1 Hfx.volcanii菌Hsp70系统基因序列分析 | 第91-92页 |
| 4.1.2.2 Hsp70系统基因敲除菌株的构建 | 第92-94页 |
| 4.1.3 Hsp70系统基因敲除菌株的鉴定 | 第94-96页 |
| 4.1.4 敲除菌株的生物学特征检测 | 第96-106页 |
| 4.1.4.1 不同温度对于敲除菌株在固体培养基上生长的影响 | 第96-97页 |
| 4.1.4.2 不同盐浓度对于敲除菌株在固体培养基上生长的影响 | 第97-99页 |
| 4.1.4.3 敲除菌株在不同温度和盐浓度培养条件下生长曲线的测定 | 第99-101页 |
| 4.1.4.4 高温和低渗刺激对于敲除菌株存活率的影响 | 第101-102页 |
| 4.1.4.5 其它环境压力对于敲除菌株生长的影响 | 第102-105页 |
| 4.1.4.6 Hsp70系统基因敲除菌株中质粒的稳定性 | 第105-106页 |
| 4.1.5 Hsp70系统中基因的敲除对于菌株其它蛋白质的影响 | 第106-108页 |
| 4.1.6 单基因敲除菌株中的基因回补 | 第108-115页 |
| 4.1.7 Hsp70系统基因的过量表达对于菌株生长的影响 | 第115-120页 |
| 4.2 讨论 | 第120-122页 |
| 4.3 小结 | 第122-123页 |
| 总结 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-147页 |
| 在读期间取得的科研成果 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
