| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 序言 | 第13-24页 |
| 1.1 光敏色素 | 第13-15页 |
| 1.1.1 光敏色素的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 光敏色素的两种光形态可逆转化 | 第15页 |
| 1.2 藻胆蛋白 | 第15-20页 |
| 1.2.1 脱辅基蛋白 | 第17页 |
| 1.2.2 藻胆色素结构及生物合成 | 第17-20页 |
| 1.3 荧光探针 | 第20-22页 |
| 1.3.1 GFP类荧光蛋白生物探针 | 第20页 |
| 1.3.2 光敏色素类荧光蛋白探针 | 第20-21页 |
| 1.3.3 藻胆蛋白类荧光蛋白生物探针 | 第21-22页 |
| 1.4 课题研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 2 蓝细菌光敏色素AphB的定点突变 | 第24-33页 |
| 2.1 序言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 主要材料 | 第24-25页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.3.1 PCR扩增目的片段 | 第27页 |
| 2.3.2 PCR产物的回收与磷酸化 | 第27-28页 |
| 2.3.3 质粒转化BL21感受态细胞 | 第28页 |
| 2.3.4 转化子筛选 | 第28页 |
| 2.3.5 各突变体重组BV表达体系的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.6 重组蛋白的表达 | 第29页 |
| 2.3.7 重组蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.8 重组蛋白光谱的测定 | 第30页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第30-32页 |
| 2.4.1 各个突变体质粒的琼脂糖凝胶电泳结果与分析 | 第30-31页 |
| 2.4.2 重组蛋白吸收荧光光谱结果与分析 | 第31-32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-33页 |
| 3 蓝细菌光敏色素AphB的随机突变 | 第33-46页 |
| 3.1 序言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.2.1 主要材料 | 第33页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-39页 |
| 3.3.1 易错PCR获得目的片段 | 第34页 |
| 3.3.2 目的片段混合shuffling | 第34-35页 |
| 3.3.3 表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.4 转化BV感受态细胞与平板表达外源蛋白 | 第36页 |
| 3.3.5 Qpix420仪器初筛 | 第36-37页 |
| 3.3.6 荧光光谱仪复筛 | 第37页 |
| 3.3.7 重组蛋白的表达 | 第37页 |
| 3.3.8 重组蛋白的纯化 | 第37页 |
| 3.3.9 重组蛋白的光谱测定 | 第37页 |
| 3.3.10 重组蛋白荧光量子产率的计算 | 第37-38页 |
| 3.3.11 重组蛋白摩尔消光系数的计算 | 第38页 |
| 3.3.12 突变体的单质粒化 | 第38页 |
| 3.3.13 突变体序列的检测 | 第38-39页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第39-45页 |
| 3.4.1 突变体初筛结果与分析 | 第39-40页 |
| 3.4.2 突变体复筛结果与分析 | 第40-41页 |
| 3.4.3 各突变体重组BV光谱结果与分析 | 第41-42页 |
| 3.4.4 各突变体重组BV后参数计算结果与分析 | 第42页 |
| 3.4.5 各突变体序列比对结果与分析 | 第42-44页 |
| 3.4.6 突变位点分析 | 第44-45页 |
| 3.5 讨论 | 第45-46页 |
| 4 蓝细菌核膜连接蛋白Apc E结合藻胆色素的定向进化与哺乳动物细胞成像 | 第46-57页 |
| 4.1 序言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料 | 第46-48页 |
| 4.2.1 主要材料 | 第46-47页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.3.1 定点突变表达载体的构建 | 第48页 |
| 4.3.2 动物细胞表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.3.3 动物细胞的培养与转染 | 第49页 |
| 4.3.4 转染动物细胞 | 第49-50页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第50-55页 |
| 4.4.1 各突变体重组PCB光谱结果与分析 | 第50-51页 |
| 4.4.2 各突变体重组PEB光谱结果与分析 | 第51页 |
| 4.4.3 各突变体重组PCB后藻胆蛋白参数计算结果 | 第51-52页 |
| 4.4.4 各突变体重组PEB后藻胆蛋白参数计算结果 | 第52-53页 |
| 4.4.5 突变位点分析 | 第53-54页 |
| 4.4.6 突变体转染细胞结果与分析 | 第54-55页 |
| 4.5 讨论 | 第55-57页 |
| 5 蓝细菌核膜连接蛋白Apc E的随机突变 | 第57-67页 |
| 5.1 序言 | 第57页 |
| 5.2 实验材料 | 第57-58页 |
| 5.2.1 主要材料 | 第57页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第57-58页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第58页 |
| 5.3 实验方法 | 第58页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第58-65页 |
| 5.4.1 突变体文库平板表达结果 | 第58-59页 |
| 5.4.2 突变体初筛结果与分析 | 第59-60页 |
| 5.4.3 各突变体重组BV光谱结果与分析 | 第60-62页 |
| 5.4.4 各突变体重组BV后参数计算结果与分析 | 第62-63页 |
| 5.4.5 各突变体序列比对结果与分析 | 第63-65页 |
| 5.5 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 附录1 攻读学位期间发表的学术论文 | 第75-76页 |
| SCI论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
