| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一篇 文献综述 | 第9-29页 |
| 第一章 马链球菌兽疫亚种毒力因子 | 第9-21页 |
| 1 类M蛋白 | 第9-13页 |
| 2 金属脂结合蛋白 | 第13页 |
| 3 链激酶 | 第13-14页 |
| 4 IgG结合蛋白 | 第14-15页 |
| 5 纤维结合素结合蛋白 | 第15页 |
| 6 透明质酸荚膜 | 第15-17页 |
| 参考文献 | 第17-21页 |
| 第二章 酵母双杂交系统概述 | 第21-29页 |
| 1 酵母双杂交系统的基本原理 | 第21-23页 |
| 2 酵母双杂交系统的研究与发展 | 第23-24页 |
| 3 酵母双杂交系统的优点和局限性 | 第24-25页 |
| ·酵母双杂交系统的优点 | 第24-25页 |
| ·酵母双杂交系统的局限性 | 第25页 |
| 4 Matchmaker~(TM) Gold Yeast Two-Hybrid System | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-29页 |
| 第二篇 试验部分 | 第29-71页 |
| 第三章 猪脐静脉血管内皮细胞全长cDNA文库的构建 | 第29-47页 |
| 摘要 | 第29-30页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·细胞、血清及培养基 | 第30页 |
| ·质粒及菌株 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·培养基及相关溶液的配置 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-39页 |
| ·猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)的培养 | 第31-32页 |
| ·SUVEC总RNA的提取及mRNA的分离 | 第32页 |
| ·SUVEC cDNA的合成及扩增 | 第32-33页 |
| ·SUVEC ds cDNA的酶切、分级分离及收集 | 第33-35页 |
| ·载体质粒pGADT7 AD(改造)的酶切及纯化回收 | 第35页 |
| ·ds cDNA与载体质粒pGADT7 AD的连接 | 第35-36页 |
| ·重组pGADT7-cDNA电转化大肠杆菌DH10B及扩增文库 | 第36页 |
| ·cDNA文库质量鉴定 | 第36-37页 |
| ·文库克隆的收集及质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·文库质粒pGADT7-cDNA转化Y187酵母菌株 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-43页 |
| ·总RNA的提取及分离的mRNA | 第39-40页 |
| ·ds cDNA的合成及鉴定 | 第40-41页 |
| ·ds cDNA片段的酶切及分级分离 | 第41页 |
| ·初始文库库容及文库的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·文库质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳检测 | 第42-43页 |
| ·Y187[pGADT7-cDNA]文库菌液分装 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-46页 |
| ABSTRACT | 第46-47页 |
| 第四章 诱饵蛋白的构建及有效性验证 | 第47-59页 |
| 摘要 | 第47-48页 |
| 1 材料 | 第48页 |
| ·质粒与菌株 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·培养及相关溶液的配置 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-53页 |
| ·ATCC35246菌株的培养及模板DNA的提取 | 第48-49页 |
| ·诱饵质粒pGBKT7-szp的构建 | 第49-51页 |
| ·诱饵质粒pGBKT7-szp有效性检测 | 第51-53页 |
| 3 结果 | 第53-55页 |
| ·目的基因szp的PCR结果 | 第53页 |
| ·重组质粒pGBKT7-szp的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·测序结果 | 第54页 |
| ·诱饵质粒pGBKT7-szp自激活及毒性检测结果 | 第54页 |
| ·Western blot检测 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| ABSTRACT | 第57-59页 |
| 第五章 类M蛋白互作蛋白的筛选 | 第59-71页 |
| 摘要 | 第59页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| ·菌株及质粒 | 第59-60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·培养基及相关溶液的配置 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-65页 |
| ·对照实验 | 第60-61页 |
| ·猪血管内皮细胞cDNA文库的筛选 | 第61-63页 |
| ·阳性克隆中阴性文库质粒的剔除 | 第63页 |
| ·阳性克隆中同种文库质粒的去重处理 | 第63-64页 |
| ·阳性酵母克隆中文库质粒的提取及扩增 | 第64页 |
| ·质粒的PCR鉴定 | 第64页 |
| ·阳性相互作用蛋白的验证 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-67页 |
| ·对照实验 | 第65页 |
| ·SUVEC cDNA文库滴度测定 | 第65页 |
| ·二倍体酵母菌的总克隆数及交配率(Mating Efficiency) | 第65-66页 |
| ·SUVEC cDNA文库筛选结果 | 第66-67页 |
| ·阳性质粒的PCR鉴定 | 第67页 |
| ·阳性相互作用蛋白的鉴定 | 第67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-70页 |
| ABSTRACT | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
