| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-31页 |
| 第一章 鸡传染性法氏囊病研究进展 | 第13-26页 |
| 1 IBDV概述 | 第13-14页 |
| 2 IBDV的基因组结构和编码的蛋白 | 第14-16页 |
| ·IBDV的基因组 | 第14页 |
| ·IBDV编码的蛋白 | 第14-16页 |
| ·VP1蛋白 | 第14-15页 |
| ·VP2蛋白 | 第15页 |
| ·VP3蛋白 | 第15-16页 |
| ·VP4蛋白 | 第16页 |
| ·VP5蛋白 | 第16页 |
| 3 IBDV的防控 | 第16-21页 |
| ·IBDV的检测方法 | 第16-18页 |
| ·免疫学技术 | 第17页 |
| ·分子生物学技术 | 第17-18页 |
| ·基因工程疫苗的研究进展 | 第18-21页 |
| ·重组亚单位疫苗 | 第18-19页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第19页 |
| ·DNA疫苗 | 第19-20页 |
| ·多表位疫苗 | 第20-21页 |
| 4 单克隆抗体技术 | 第21-26页 |
| ·单克隆抗体技术的原理及制备方法 | 第21-22页 |
| ·单克隆抗体技术的发展 | 第22-24页 |
| ·杂交瘤技术的拓展 | 第22页 |
| ·基因工程抗体 | 第22-24页 |
| ·IBDV单克隆抗体的应用 | 第24-26页 |
| ·IBDV的检测 | 第24页 |
| ·IBDV抗原表位分析 | 第24页 |
| ·IBDV的防治 | 第24-26页 |
| 参考文献 | 第26-31页 |
| 第二篇 试验研究 | 第31-67页 |
| 第一章 传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达 | 第31-41页 |
| 1 材料与方法 | 第32-34页 |
| ·质粒和菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·VP2基因原核表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·VP2基因重组表达质粒的诱导表达 | 第33页 |
| ·表达条件的优化 | 第33页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第33-34页 |
| ·夹心ELISA检测 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| ·Western-blotting分析 | 第33-34页 |
| 2 结果 | 第34-36页 |
| ·VP2基因原核表达质粒的构建 | 第34页 |
| ·VP2基因原核表达质粒的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·表达条件的优化 | 第35-36页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第36页 |
| ·夹心ELISA检测 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| ·Western-blotting分析 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 第二章 传染性法氏囊病病毒VP2基因在昆虫细胞中的表达 | 第41-51页 |
| 1 材料与方法 | 第42-44页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·重组杆状病毒供体质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·重组杆状病毒表达质粒的构建 | 第43页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第43页 |
| ·重组杆状病毒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·Western blotting分析 | 第43-44页 |
| ·IFA检测 | 第44页 |
| ·电镜检查 | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-47页 |
| ·重组杆状病毒供体质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·重组杆状病毒表达质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第46页 |
| ·重组杆状病毒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·Western-blotting分析 | 第46页 |
| ·IFA | 第46-47页 |
| ·电镜观察 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第三章 传染性法氏囊病病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与应用 | 第51-67页 |
| 1 材料与方法 | 第52-57页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·菌株、质粒和毒株 | 第52-53页 |
| ·细胞系和实验动物 | 第53页 |
| ·免疫抗原的制备 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌表达的重组VP2蛋白的制备 | 第53页 |
| ·杆状病毒表达的重组VP2蛋白的制备 | 第53页 |
| ·IBDV病毒抗原的制备 | 第53-54页 |
| ·杂交瘤细胞系的建立 | 第54-55页 |
| ·动物免疫 | 第54页 |
| ·细胞融合 | 第54页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第54页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第54-55页 |
| ·诱生腹水 | 第55页 |
| ·杂交瘤细胞的稳定性 | 第55页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第55-56页 |
| ·类鉴定 | 第55页 |
| ·抗体效价测定 | 第55页 |
| ·抗原表位的分析 | 第55页 |
| ·特异性鉴定 | 第55-56页 |
| ·单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第56-57页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第56页 |
| ·单克隆抗体的酶结合物的制备 | 第56页 |
| ·夹心ELISA试验条件的优化 | 第56-57页 |
| ·夹ELISA检测方法的应用 | 第57页 |
| 2 结果 | 第57-61页 |
| ·免疫抗原的制备 | 第57页 |
| ·杂交瘤细胞系的建立 | 第57-58页 |
| ·筛选条件的确定 | 第57页 |
| ·细胞融合结果 | 第57-58页 |
| ·分泌抗体稳定性的测定 | 第58页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第58-60页 |
| ·亚类与抗体效价 | 第58页 |
| ·抗原表位分析 | 第58-59页 |
| ·抗体特异性 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第60-61页 |
| ·单克隆抗体的纯化和酶结合物的制备 | 第60页 |
| ·夹心ELISA试验条件的优化 | 第60-61页 |
| ·夹心ELISA检测方法的应用 | 第61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 全文总结 | 第67-69页 |
| 附录:常用试剂的配制 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第75页 |
