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人Ⅰ型免疫缺陷病毒Rev蛋白促进丙型肝炎病毒翻译的分子机制研究

中文摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 人免疫缺陷病毒的研究进展第13-22页
    1.1 艾滋病毒的结构第13页
    1.2 艾滋病毒的复制周期第13-20页
        1.2.1 病毒入侵第13-16页
        1.2.2 早期(整合前)的艾滋病毒复制事件:反转录和核输入第16-17页
        1.2.3 病毒整合第17-18页
        1.2.4 晚期(整合后)事件:病毒基因的表达第18-20页
    1.3 艾滋病毒的包装和释放第20-21页
    1.4 艾滋病毒的潜伏第21-22页
第二章 丙型肝炎病毒分子生物学、复制和免疫反应概述第22-32页
    2.1 HCV结构蛋白第23-24页
        2.1.1 核心蛋白第23页
        2.1.2 包膜糖蛋白第23-24页
        2.1.3 P7蛋白第24页
    2.2 HCV非结构蛋白第24-27页
        2.2.1 NS2第24-25页
        2.2.2 NS3第25页
        2.2.3 NS4A第25-26页
        2.2.4 NS4B第26页
        2.2.5 NS5A第26-27页
        2.2.6 NS5B第27页
    2.3 HCV病毒学第27-28页
    2.4 病毒入侵第28-29页
    2.5 病毒RNA的复制和翻译第29-30页
    2.6 治疗丙型肝炎病毒第30-32页
第三章 丙型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒共感染的研究进展第32-43页
    3.1 丙型肝炎病毒对艾滋病毒感染的影响第32-33页
    3.2 艾滋病对丙型肝炎病毒感染毒的影响第33-34页
    3.3 在HCV/HIV共感染中细胞介导的免疫第34-38页
        3.3.1 丙型肝炎病毒特异性免疫反应第34-36页
        3.3.2 肝损伤是细胞介导的免疫应答的结果第36-38页
    3.4 HIV-HCV共感染病人的治疗第38-40页
    3.5 未来:更新、更有效的药物和靶向治疗第40-43页
第四章 人免疫缺陷病毒REV蛋白功能简介第43-52页
    4.1 REV蛋白和REV应答元件(RRE)第43-45页
    4.2 REv穿梭和病毒RNA输出第45-46页
    4.3 REV和翻译第46-50页
        4.3.1 Rev和翻译有关第46-47页
        4.3.3 Rev调控翻译的证据第47-49页
        4.3.4 HIV-1基因组RNA上第二个Rev的结合位点第49-50页
    4.4 REV和基因组包装第50-52页
第五章 HIV-1上调HCV基因表达的研究第52-69页
    5.1 前言第52-53页
    5.2 实验材料第53-54页
        5.2.1 质粒和细菌菌株第53页
        5.2.2 哺乳动物细胞系第53页
        5.2.3 工具酶第53-54页
        5.2.4 试剂和抗体第54页
    5.3 实验方法第54-64页
        5.3.1 感受态细菌的制备及转化第54-55页
        5.3.2 碱裂解法质粒的提取第55-56页
        5.3.3 凝胶回收DNA片段第56页
        5.3.4 Rev蛋白突变质粒的构建第56-59页
        5.3.5 RNA的体外转录第59-60页
        5.3.6 细胞培养基配置第60页
        5.3.7 细胞培养、复苏和冻存第60-61页
        5.3.8 细胞脂质体转染第61页
        5.3.9 检测荧光素酶活性第61页
        5.3.10 蛋白免疫印迹实验第61-63页
        5.3.11 体内免疫共沉淀第63-64页
    5.4 实验结果第64-67页
        5.4.1 HIV上调HCV基因表达第64页
        5.4.2 筛选上调HCV基因表达的HIV蛋白第64-65页
        5.4.3 HIV Rev蛋白突变体的构建第65页
        5.4.4 HIV Rev蛋白特异性的上调HCV基因的表达第65-67页
        5.4.5 HIV Rev蛋白能与HCV RNA相互作用第67页
    5.5 讨论第67-69页
第六章 REV蛋白与HCV 5'UTR相互作用的研究第69-88页
    6.1 前言第69-71页
    6.2 实验材料第71-72页
        6.2.1 质粒和细菌菌种第71页
        6.2.2 工具酶第71页
        6.2.3 试剂、抗体和蛋白第71-72页
    6.3 实验方法第72-79页
        6.3.1 感受态细菌的制备及转化(见上一章)第72页
        6.3.2 碱裂解法质粒提取(见上一章)第72页
        6.3.3 凝胶回收DNA片段(见上一章)第72页
        6.3.4 Rev蛋白及其突变蛋白表达质粒的构建第72-73页
        6.3.5 Rev蛋白及其突变蛋白的诱导表达及鉴定第73-75页
        6.3.6 pHCV 5’+3’质粒的构建第75-76页
        6.3.7 RNA的制备第76-78页
        6.3.8 RNA探针的制备第78页
        6.3.9 EMSA实验第78-79页
    6.4 实验结果第79-86页
        6.4.1 Rev及其突变蛋白的原核表达、纯化及鉴定第79-80页
        6.4.2 EMSA实验所需RNA的制备第80-82页
        6.4.3 Rev蛋白与HCV 5'-UTRRNA结合第82-83页
        6.4.4 Rev蛋白与HCV 5'-UTRRNA结合的蛋白特异性第83页
        6.4.5 Rev蛋白与HCV 5'-UTRRNA结合的RNA特异性第83-84页
        6.4.6 Rev蛋白与HCV 5'-UTR截短RNA的相互作用第84-85页
        6.4.7 Rev蛋白与HCV 5'-UTR第三区域缺失突变RNA的相互作用第85-86页
        6.4.8 Rev蛋白与HCV 5'-UTR第三区第一个内部环结构域突变RNA的相互作用第86页
    6.5 讨论第86-88页
第七章 REV上调HCV IRES介导的翻译第88-94页
    7.1 前言第88-89页
    7.2 实验材料第89页
    7.3 实验方法第89-90页
        7.3.1 单顺反子报告因子RNA制备第89-90页
    7.4 实验结果第90-92页
        7.4.1 单顺反子报告因子RNA制备第90-91页
        7.4.2 Rev蛋白激活HCV IRES RNA的翻译第91页
        7.4.3 Rev蛋白激活HCV IRES RNA的翻译依赖于HCV结合位点第91-92页
    7.5 讨论第92-94页
研究意义和创新第94-95页
参考文献第95-124页
博士在读期间发表与待发表论文第124-125页
致谢第125页

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