| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一部分 背景综述 | 第16-57页 |
| 第一章 乙型肝炎病毒 | 第16-31页 |
| 1.1 HBV的分子生物学 | 第16-17页 |
| 1.2 HBV的复制和转录 | 第17-18页 |
| 1.3 HBV编码的蛋白质 | 第18-20页 |
| 1.3.1 核壳蛋白 | 第18页 |
| 1.3.2 多聚酶蛋白 | 第18页 |
| 1.3.3 包膜蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.4 X蛋白 | 第19-20页 |
| 1.4 HBV的感染和致病 | 第20-24页 |
| 1.4.1 急性乙肝病毒感染 | 第20-21页 |
| 1.4.2 慢性乙肝病毒感染 | 第21-23页 |
| 1.4.3 肝硬化,肝衰竭和肝癌 | 第23-24页 |
| 1.5 HBV的治疗 | 第24-31页 |
| 1.5.1 干扰素 | 第24-27页 |
| 1.5.2 核苷类似物 | 第27-29页 |
| 1.5.3 HBV的治疗展望 | 第29-31页 |
| 第二章 HBx蛋白的功能 | 第31-38页 |
| 2.1 HBx概述 | 第31页 |
| 2.2 HBx在乙肝病毒生活周期中的作用 | 第31-32页 |
| 2.3 HBx的转录激活作用 | 第32-33页 |
| 2.4 HBx激活细胞质信号转导途径 | 第33-34页 |
| 2.5 HBx作用的分子靶标及其机制 | 第34-36页 |
| 2.6 HBx和细胞凋亡 | 第36-38页 |
| 第三章 环加氧酶2(COX-2) | 第38-49页 |
| 3.1 COX-2表达的调控 | 第39页 |
| 3.2 COX-2酶活性的调控 | 第39-42页 |
| 3.2.1 NSAlDs对COX-2的抑制 | 第39-40页 |
| 3.2.2 COX-2特异性的结构基础 | 第40-41页 |
| 3.2.3 COX-2特异性预测 | 第41页 |
| 3.2.4 COX-2特异性抑制剂的治疗用途 | 第41-42页 |
| 3.3 COX-2的病理和生理学功能 | 第42-49页 |
| 3.3.1 COX-2和中枢神经系统 | 第42-43页 |
| 3.3.2 COX-2和癌症 | 第43-44页 |
| 3.3.3 COX-2和胃肠道功能 | 第44-45页 |
| 3.3.4 COX-2和肾功能 | 第45-46页 |
| 3.3.5 COX-2和心血管系统 | 第46-48页 |
| 3.3.6 COX-2和生殖性功能 | 第48-49页 |
| 第四章 DNA甲基化修饰 | 第49-57页 |
| 4.1 甲基化胞嘧啶和CpG岛的分布 | 第49-50页 |
| 4.2 维持性甲基化作用 | 第50-51页 |
| 4.3 从头甲基化作用 | 第51页 |
| 4.4 DNA甲基化和转录抑制 | 第51-54页 |
| 4.5 DNA去甲基化和发育及组织特异性分化 | 第54-55页 |
| 4.6 DNA甲基化和癌症 | 第55-57页 |
| 第二部分 研究工作 | 第57-98页 |
| 第五章 HBV诱导COX-2表达的研究 | 第57-70页 |
| 5.1 前言 | 第57页 |
| 5.2 实验材料 | 第57-58页 |
| 5.2.1 临床样本 | 第57页 |
| 5.2.2 菌种和质粒 | 第57页 |
| 5.2.3 细胞 | 第57-58页 |
| 5.2.4 试剂 | 第58页 |
| 5.3 实验方法 | 第58-65页 |
| 5.3.1 血清中PGE2的检测 | 第58页 |
| 5.3.2 转染用质粒DNA的提取 | 第58-59页 |
| 5.3.3 真核细胞的培养(复苏,培养及冻存) | 第59-60页 |
| 5.3.4 真核细胞的转染 | 第60页 |
| 5.3.5 细胞总RNA提取以及逆转录PCR | 第60-62页 |
| 5.3.6 Western blot | 第62-64页 |
| 5.3.7 荧光素酶活性检测 | 第64-65页 |
| 5.4 实验结果 | 第65-68页 |
| 5.4.1 清学结果 | 第65页 |
| 5.4.2 HBV能够诱导COX-2的表达 | 第65-66页 |
| 5.4.3 HBV的X蛋白能够诱导COX-2的表达 | 第66-68页 |
| 5.5 讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 HBx激活COX-2启动子顺式元件的确定 | 第70-74页 |
| 6.1 前言 | 第70页 |
| 6.2 实验材料 | 第70页 |
| 6.2.1 质粒 | 第70页 |
| 6.2.2 细胞 | 第70页 |
| 6.2.3 试剂 | 第70页 |
| 6.3 实验方法 | 第70-71页 |
| 6.3.1 转染用质粒DNA的提取(见5.3.2) | 第70页 |
| 6.3.2 真核细胞的培养(见5.3.3) | 第70页 |
| 6.3.3 真核细胞的转染(见5.3.4) | 第70-71页 |
| 6.3.4 荧光素酶活性检测(见5.3.7) | 第71页 |
| 6.3.5 Western blot(见5.3.6) | 第71页 |
| 6.4 实验结果 | 第71-72页 |
| 6.4.1 C/EBP和CRE位点在HBx上调COX-2启动子活性中起重要作用 | 第71-72页 |
| 6.4.2 转录因子C/EBPβ在HBx上调COX-2启动子活性中起重要作用 | 第72页 |
| 6.5 讨论 | 第72-74页 |
| 第七章 与HBx相互作用的转录因子的鉴定及其与COX-2启动子结合的分析 | 第74-85页 |
| 7.1 前言 | 第74页 |
| 7.2 实验材料 | 第74-75页 |
| 7.2.1 质粒 | 第74页 |
| 7.2.2 细胞 | 第74页 |
| 7.2.3 试剂 | 第74-75页 |
| 7.3 实验方法 | 第75-79页 |
| 7.3.1 转染用质粒DNA的提取(见5.3.2) | 第75页 |
| 7.3.2 真核细胞的培养(见5.3.3) | 第75页 |
| 7.3.3 真核细胞的转染(见5.3.4) | 第75页 |
| 7.3.4 荧光素酶活性检测(见5.3.7) | 第75页 |
| 7.3.5 Western blot(见5.3.6) | 第75页 |
| 7.3.6 免疫共沉淀(CoIP) | 第75-76页 |
| 7.3.7 非变性电泳凝胶迁移实验(EMSA) | 第76-77页 |
| 7.3.8 染色质免疫沉淀实验(ChIP) | 第77-79页 |
| 7.3.9 哺乳动物双杂交实验 | 第79页 |
| 7.4 实验结果 | 第79-83页 |
| 7.4.1 免疫共沉淀研究HBx和C/EBPβ的相互作用 | 第79-80页 |
| 7.4.2 哺乳动物双杂交系统验HBx和C/EBPβ的相互作用 | 第80页 |
| 7.4.3 HBx增强C/EBPβ在COX-2启动子上结合的体外实验鉴定 | 第80-81页 |
| 7.4.4 HBx增强C/EBPβ在COX-2启动子上结合的体内实验鉴定 | 第81-82页 |
| 7.4.5 转录因子CBP/p300在HBx上调COX-2启动子活性中起重要作用 | 第82-83页 |
| 7.4.6 HBx增强CBP/p300在COX-2启动子上结合的体内实验鉴定 | 第83页 |
| 7.5 讨论 | 第83-85页 |
| 第八章 HBV诱导COX-2表达中表观遗传学的研究 | 第85-96页 |
| 8.1 前言 | 第85页 |
| 8.2 实验材料 | 第85-86页 |
| 8.2.1 质粒 | 第85页 |
| 8.2.2 细胞 | 第85页 |
| 8.2.3 试剂 | 第85-86页 |
| 8.3 实验方法 | 第86-90页 |
| 8.3.1 转染用质粒DNA的提取(见5.3.2) | 第86页 |
| 8.3.2 真核细胞的培养(见5.3.3) | 第86页 |
| 8.3.3 真核细胞的转染(见5.3.4) | 第86页 |
| 8.3.4 荧光素酶活性检测(见5.3.7) | 第86页 |
| 8.3.5 Western blot(见5.3.6) | 第86页 |
| 8.3.6 非变性电泳凝胶迁移实验(见7.3.7) | 第86页 |
| 8.3.7 染色质免疫沉淀实验(见7.3.8) | 第86页 |
| 8.3.8 甲基化测序分析 | 第86-89页 |
| 8.3.9 甲基转移酶活性测定 | 第89-90页 |
| 8.4 实验结果 | 第90-94页 |
| 8.4.1 甲基化和COX-2启动子活性密切相关 | 第90页 |
| 8.4.2 HBV的表达能够降低COX-2启动子区域的甲基化水平 | 第90-91页 |
| 8.4.3 位点去甲基化对NF-AT在COX-2启动子上结合影响的体外实验鉴定 | 第91-92页 |
| 8.4.4 HBV的表达对细胞内甲基转移酶活性的影响 | 第92-93页 |
| 8.4.5 不同甲基转移酶对COX-2启动子活性的影响 | 第93-94页 |
| 8.4.6 HBV的表达影响甲基转移酶在COX-2启动子上结合的鉴定 | 第94页 |
| 8.5 讨论 | 第94-96页 |
| 第九章 研究总结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-122页 |
| 发表论文 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
