| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-13页 |
| 1.1 昆虫病原线虫及共生细菌复合体 | 第8-9页 |
| 1.2 昆虫病原线虫共生菌简介 | 第9页 |
| 1.3 昆虫病原线虫共生菌的型变 | 第9-10页 |
| 1.4 昆虫病原线虫共生菌杀虫毒素 | 第10-12页 |
| 1.4.1 Tc 杀虫毒素蛋白复合物 | 第10-11页 |
| 1.4.2 Txp40 杀虫蛋白 | 第11-12页 |
| 1.5 本实验的目的及意义 | 第12-13页 |
| 第二章 TXP40 杀虫毒素的分离纯化 | 第13-20页 |
| 2.1 材料 | 第13-15页 |
| 2.1.1 实验材料： | 第13页 |
| 2.1.2 实验药品 | 第13页 |
| 2.1.3 培养基 | 第13-14页 |
| 2.1.4 native-PAGE 电泳溶液配制 | 第14页 |
| 2.1.5 抗原抗体点杂交溶液配制 | 第14页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第14-15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-16页 |
| 2.2.1 XnHB310 菌株发酵液的制备 | 第15页 |
| 2.2.2 XnHB310 胞内总蛋白的提取 | 第15页 |
| 2.2.3 native-PAGE 蛋白电泳切胶回收 | 第15-16页 |
| 2.2.4 蛋白质条带的定位及蛋白样品的洗脱 | 第16页 |
| 2.2.5 回收蛋白对大蜡螟的血腔注射活性 | 第16页 |
| 2.2.6 回收蛋白与 Txp40 抗体的点杂交 | 第16页 |
| 2.3 结果与分析 | 第16-19页 |
| 2.3.1 分离纯化的 Txp40 蛋白及 SDS-PAGE 检测 | 第16-18页 |
| 2.3.2 纯化 Txp40 蛋白大蜡螟血腔注射活性测定 | 第18页 |
| 2.3.3 Txp40 抗体的点杂交检测结果 | 第18-19页 |
| 2.4 讨论 | 第19-20页 |
| 第三章 TXP40 基因的原核表达 | 第20-30页 |
| 3.1 材料 | 第20-21页 |
| 3.1.1 供试菌株和质粒载体 | 第20页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第20页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第20-21页 |
| 3.2 实验方法 | 第21-25页 |
| 3.2.1 引物设计及 PCR 扩增 | 第21页 |
| 3.2.2 质粒双酶切 | 第21-22页 |
| 3.2.3 目的基因与 pET-28a 载体连接转化 | 第22页 |
| 3.2.4 阳性克隆的筛选 | 第22-23页 |
| 3.2.5 重组蛋白诱导表达 | 第23页 |
| 3.2.6 Western-blotting | 第23-24页 |
| 3.2.7 重组 Txp40 蛋白纯化 | 第24页 |
| 3.2.8 重组 Txp40 蛋白的杀虫活性的测定 | 第24-25页 |
| 3.3 结果与分析 | 第25-29页 |
| 3.3.1 带有双酶切位点的 txp40 的 PCR 扩增 | 第25页 |
| 3.3.2 构建的重组表达载体 pET28a-txp40 及鉴定 | 第25-26页 |
| 3.3.3 txp40 基因在大肠杆菌中的表达 | 第26-27页 |
| 3.3.4 重组 Txp40 蛋白的 Western bloting | 第27页 |
| 3.3.5 重组 Txp40 蛋白的纯化 | 第27页 |
| 3.3.6 重组 Txp40 蛋白的杀虫活性 | 第27-29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第四章 TXP40 蛋白毒素作用靶标的研究 | 第30-40页 |
| 4.1 材料 | 第30-31页 |
| 4.1.1 实验药品 | 第30页 |
| 4.1.2 供试昆虫 | 第30页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第30页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第30-31页 |
| 4.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 4.2.1 大蜡螟幼虫总蛋白提取 | 第31页 |
| 4.2.2 大蜡螟幼虫总蛋白与 Txp40 毒素免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 4.2.3 洗脱 | 第32页 |
| 4.2.4 捕获蛋白的鉴定 | 第32-33页 |
| 4.3 结果与分析 | 第33-39页 |
| 4.3.1 提取的大蜡螟幼虫总蛋白 | 第33页 |
| 4.3.2 捕捉的蛋白 | 第33-39页 |
| 4.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
