| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要缩略词 | 第9-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.1 植物耐盐机制研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 短命植物的形态与耐盐性 | 第15-16页 |
| 1.3 构建全长 cDNA 文库的意义 | 第16页 |
| 1.4 Gateway 技术构建文库的原理 | 第16-18页 |
| 1.5 均一化文库构建研究进展 | 第18-19页 |
| 1.6 表达序列标签(EST) | 第19-21页 |
| 1.7 两个耐盐相关基因的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.7.1 Na+/H+逆向转运蛋白基因 NHX | 第21页 |
| 1.7.2 类钙调素蛋白基因 CML13 | 第21-23页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 小拟南芥均一化全长 cDNA 文库的构建 | 第24-37页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 种子萌发及幼苗处理 | 第24页 |
| 2.2.2 总 RNA 的提取和 mRNA 的分离 | 第24-25页 |
| 2.2.3 全长 cDNA 初始文库的构建 | 第25-29页 |
| 2.2.4 均一化全长 cDNA 文库的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.5 文库质量鉴定 | 第30页 |
| 2.2.6 文库均一化效果检测 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.3.1 小拟南芥叶片的总 RNA 和 mRNA | 第31页 |
| 2.3.2 全长 cDNA 初始文库容量测定 | 第31-33页 |
| 2.3.3 均一化全长 cDNA 文库容量测定 | 第33-34页 |
| 2.3.4 cDNA 文库均一化效果检测 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 2.5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 均一化全长 cDNA 文库随机克隆测序及序列分析 | 第37-51页 |
| 3.1 材料 | 第37页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂及菌株 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-38页 |
| 3.2.1 均一化全长 cDNA 文库测序 | 第37页 |
| 3.2.2 文库中 ESTs 生物信息学分析 | 第37页 |
| 3.2.3 文库中 16 个 contigs 的表达分析 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-49页 |
| 3.3.1 EST 序列测定、编辑和装配 | 第38-40页 |
| 3.3.2 Unigenes 功能注释和分类 | 第40-45页 |
| 3.3.3 文库中 16 个 contigs 的表达分析 | 第45-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 3.5 结论 | 第50-51页 |
| 第四章 小拟南芥 OpNHX1 基因的表达与功能分析 | 第51-63页 |
| 4.1 材料 | 第51-53页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 培养基的配制 | 第51-52页 |
| 4.1.4 菌株与质粒 | 第52-53页 |
| 4.2 方法 | 第53-55页 |
| 4.2.1 扩增 OpNHX1 基因的全长 | 第53-54页 |
| 4.2.2 OpNHX1 基因的生物信息学分析 | 第54页 |
| 4.2.3 OpNHX1 基因表达分析 | 第54页 |
| 4.2.4 构建过量表达载体及转基因拟南芥耐盐性分析 | 第54-55页 |
| 4.2.5 OpNHX1 在酵母中的功能验证 | 第55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-61页 |
| 4.3.1 OpNHX1 全长基因的克隆 | 第55-56页 |
| 4.3.2 OpNHX1 基因的序列分析 | 第56-58页 |
| 4.3.3 OpNHX1 基因的组织表达模式 | 第58-59页 |
| 4.3.4 OpNHX1 基因的诱导表达分析 | 第59页 |
| 4.3.5 转基因拟南芥耐盐性分析 | 第59-60页 |
| 4.3.6 OpNHX1 在酵母突变体中的功能互补验证 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 4.5 结论 | 第62-63页 |
| 第五章 小拟南芥 OpCML13 基因的克隆与分析 | 第63-75页 |
| 5.1 材料 | 第63页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第63页 |
| 5.1.2 试剂 | 第63页 |
| 5.2 方法 | 第63-67页 |
| 5.2.1 小拟南芥的培养及 RNA 提取 | 第63页 |
| 5.2.2 小拟南芥 OpCML13 基因的克隆 | 第63-65页 |
| 5.2.3 OpCML13 基因的生物信息学分析 | 第65页 |
| 5.2.4 OpCML13 基因组织表达分析 | 第65页 |
| 5.2.5 OpCML13 基因逆境胁迫表达分析 | 第65-66页 |
| 5.2.6 过量表达载体 p35S:OpCML13 的构建 | 第66-67页 |
| 5.3 结果与分析 | 第67-73页 |
| 5.3.1 OpCML13 基因的克隆 | 第67页 |
| 5.3.2 OpCML13 基因的生物信息学分析 | 第67-71页 |
| 5.3.3 OpCML13 基因组织表达分析 | 第71-72页 |
| 5.3.4 OpCML13 基因的逆境胁迫表达分析 | 第72页 |
| 5.3.5 p35S:OpCML13 植物过量表达载体的构建 | 第72-73页 |
| 5.4 讨论 | 第73-74页 |
| 5.5 小结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 附录 1 文库中 16 个 contigs 表达分析的引物 | 第81-82页 |
| 附录 2 文库中 894 个 ESTs 信息总汇 | 第82页 |
| 附录 3 文库中 unigenes 的 KEGG pathway 分类情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简介 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85页 |
