| 摘要 | 第6-9页 |
| summary | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 引言 | 第13-14页 |
| 1.2 植物基因克隆的主要研究方法 | 第14-17页 |
| 1.2.1 基因文库 | 第14-15页 |
| 1.2.2 插入突变技术 | 第15页 |
| 1.2.3 图位克隆 | 第15-16页 |
| 1.2.4 生物芯片 | 第16页 |
| 1.2.5 电子克隆 | 第16页 |
| 1.2.6 基因差异表达技术 | 第16-17页 |
| 1.2.7 高通量测序技术 | 第17页 |
| 1.3 国内外林木抗旱研究现状 | 第17-23页 |
| 1.3.1 植物形态结构特征与抗旱性 | 第17-18页 |
| 1.3.2 干旱胁迫下植物生理生化变化 | 第18-19页 |
| 1.3.3 植物对干旱胁迫信号的感应和传导 | 第19-20页 |
| 1.3.4 干旱胁迫应答基因 | 第20-23页 |
| 1.3.4.1 耐旱相关的功能基因及蛋白 | 第20-22页 |
| 1.3.4.2 耐旱相关的调控基因及蛋白 | 第22-23页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.5 研究目标和主要研究内容 | 第24-25页 |
| 1.5.1 研究目标 | 第24页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.6 研究技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 马尾松抗旱基因的DNA片段克隆 | 第26-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.2 方法 | 第27-28页 |
| 2.1.2.1 马尾松基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.1.2.2 抗旱基因的PCR引物设计 | 第27页 |
| 2.1.2.3 抗旱基因片段的克隆 | 第27-28页 |
| 2.1.3 生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-40页 |
| 2.2.1 马尾松基因组DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.2 APX基因的克隆及分析 | 第28-29页 |
| 2.2.3 AQP基因的克隆及分析 | 第29-31页 |
| 2.2.4 CBL基因的克隆及分析 | 第31-32页 |
| 2.2.5 DHN基因的克隆及分析 | 第32-34页 |
| 2.2.6 ERF基因的克隆及分析 | 第34-35页 |
| 2.2.7 GPX基因的克隆及分析 | 第35-36页 |
| 2.2.8 NAC基因的克隆及分析 | 第36-38页 |
| 2.2.9 PEPC基因的克隆及分析 | 第38-39页 |
| 2.2.10 POD基因的克隆及分析 | 第39-40页 |
| 2.3 讨论与小结 | 第40-43页 |
| 2.3.1 讨论 | 第40-42页 |
| 2.3.2 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 抗旱相关基因的全长序列克隆及序列分析 | 第43-99页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 3.1.1 试验材料与试剂 | 第43页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第43-45页 |
| 3.1.2.1 RNA的提取 | 第43页 |
| 3.1.2.2 引物设计与基因全长扩增 | 第43-45页 |
| 3.1.3 序列分析 | 第45-46页 |
| 3.2 结果与分析 | 第46-94页 |
| 3.2.1 RNA的提取 | 第46页 |
| 3.2.2 NAC基因的全长克隆及分析 | 第46-53页 |
| 3.2.2.1 5′-RACE扩增 | 第46页 |
| 3.2.2.2 3′-RACE扩增 | 第46-47页 |
| 3.2.2.3 NAC基因全长序列拼接 | 第47页 |
| 3.2.2.4 NAC蛋白质特征分析 | 第47-53页 |
| 3.2.3 ERF基因的全长克隆及分析 | 第53-59页 |
| 3.2.3.1 5′-RACE扩增 | 第53页 |
| 3.2.3.2 3′-RACE扩增 | 第53页 |
| 3.2.3.3 ERF基因全长序列拼接 | 第53-54页 |
| 3.2.3.4 ERF蛋白质特征分析 | 第54-59页 |
| 3.2.4 CBL基因的全长克隆及分析 | 第59-65页 |
| 3.2.4.1 5′-RACE扩增 | 第59页 |
| 3.2.4.2 3′-RACE扩增 | 第59-60页 |
| 3.2.4.3 CBL基因全长序列拼接 | 第60页 |
| 3.2.4.4 CBL蛋白质特征分析 | 第60-65页 |
| 3.2.5 DHN基因的全长克隆及分析 | 第65-72页 |
| 3.2.5.1 5′-RACE扩增 | 第65-66页 |
| 3.2.5.2 3′-RACE扩增 | 第66页 |
| 3.2.5.3 DHN基因全长序列拼接 | 第66页 |
| 3.2.5.4 DHN蛋白质特征分析 | 第66-72页 |
| 3.2.6 GPX基因的全长克隆及分析 | 第72-78页 |
| 3.2.6.1 5′-RACE扩增 | 第72页 |
| 3.2.6.2 3′-RACE扩增 | 第72页 |
| 3.2.6.3 GPX基因全长序列拼接 | 第72-73页 |
| 3.2.6.4 GPX蛋白质特征分析 | 第73-78页 |
| 3.2.7 AQP基因的全长克隆及分析 | 第78-86页 |
| 3.2.7.1 5′-RACE扩增 | 第78页 |
| 3.2.7.2 3′-RACE扩增 | 第78-79页 |
| 3.2.7.3 AQP基因全长序列拼接 | 第79页 |
| 3.2.7.4 AQP蛋白质特征分析 | 第79-86页 |
| 3.2.8 POD基因的全长克隆及分析 | 第86-94页 |
| 3.2.8.1 5′-RACE扩增 | 第86-87页 |
| 3.2.8.2 3′-RACE扩增 | 第87页 |
| 3.2.8.3 POD基因全长序列拼接 | 第87页 |
| 3.2.8.4 POD蛋白质特征分析 | 第87-94页 |
| 3.3 讨论与小结 | 第94-99页 |
| 3.3.1 讨论 | 第94-98页 |
| 3.3.2 小结 | 第98-99页 |
| 第四章 抗旱基因在干旱胁迫下的表达分析 | 第99-114页 |
| 4.1 材料与方法 | 第99-102页 |
| 4.1.1 试验材料与试剂 | 第99页 |
| 4.1.2 试验方法 | 第99-102页 |
| 4.1.2.1 材料的处理 | 第99页 |
| 4.1.2.2 RNA的处理 | 第99-100页 |
| 4.1.2.3 PmACTIN基因的克隆 | 第100页 |
| 4.1.2.4 抗旱相关基因引物设计 | 第100页 |
| 4.1.2.5 半定量RT-PCR体系的建立 | 第100-101页 |
| 4.1.2.6 半定量RT-PCR检测抗旱相关基因的组织分布 | 第101页 |
| 4.1.2.7 Real-Time PCR扩增体系及程序 | 第101页 |
| 4.1.2.8 Real-Time PCR扩增效率 | 第101页 |
| 4.1.2.9 基因相对表达量的分析方法 | 第101-102页 |
| 4.2 结果与分析 | 第102-110页 |
| 4.2.1 内参PmACTIN基因的克隆 | 第102-103页 |
| 4.2.2 RNA的提取与检测 | 第103-104页 |
| 4.2.3 半定量RT-PCR体系的建立 | 第104页 |
| 4.2.4 组织分布 | 第104-105页 |
| 4.2.5 扩增效率 | 第105-106页 |
| 4.2.6 溶解曲线 | 第106页 |
| 4.2.7 抗旱相关基因的Real-Time PCR扩增 | 第106-107页 |
| 4.2.8 待测基因在干旱处理下的表达谱分析 | 第107-110页 |
| 4.2.8.1 PmPOD基因的表达谱 | 第107-108页 |
| 4.2.8.2 PmDHN基因的表达谱 | 第108-109页 |
| 4.2.8.3 PmPIP1基因的表达谱 | 第109页 |
| 4.2.8.4 PmGPX6基因的表达谱 | 第109-110页 |
| 4.2.8.5 PmCBL3基因的表达谱 | 第110页 |
| 4.3 讨论与小结 | 第110-114页 |
| 4.3.1 讨论 | 第110-113页 |
| 4.3.2 小结 | 第113-114页 |
| 第五章 马尾松抗旱相关基因植物表达载体构建 | 第114-128页 |
| 5.1 材料与方法 | 第114-116页 |
| 5.1.1 材料 | 第114页 |
| 5.1.1.1 材料 | 第114页 |
| 5.1.1.2 菌株及载体 | 第114页 |
| 5.1.1.3 试验中所用试剂盒与药品 | 第114页 |
| 5.1.2 方法 | 第114-116页 |
| 5.1.2.1 植物表达载体的构建 | 第114-116页 |
| 5.2 结果与分析 | 第116-126页 |
| 5.2.1 PmPIP1基因植物表达载体构建 | 第116-120页 |
| 5.2.1.1 PmPIP1基因全长的克隆 | 第116-117页 |
| 5.2.1.2 植物表达载体pBI121-PmPIP1的构建 | 第117-119页 |
| 5.2.1.3 植物表达载体pBI121-PmPIP1转入农杆菌检测 | 第119-120页 |
| 5.2.2 PmCBL3基因植物表达载体构建 | 第120-122页 |
| 5.2.2.1 PmCBL3基因全长的克隆 | 第120页 |
| 5.2.2.2 植物表达载体pSH737-PmCBL3的构建 | 第120-122页 |
| 5.2.2.3 植物表达载体pSH737-PmCBL3转入农杆菌检测 | 第122页 |
| 5.2.3 PmGPX6基因植物表达载体构建 | 第122-124页 |
| 5.2.3.1 PmGPX6基因全长的克隆 | 第122页 |
| 5.2.3.2 植物表达载体pBI121-PmGPX6的构建 | 第122-124页 |
| 5.2.4 PmPOD基因植物表达载体构建 | 第124-125页 |
| 5.2.4.1 PmPOD基因全长的克隆 | 第124页 |
| 5.2.4.2 植物表达载体pBI121-PmPOD的构建 | 第124页 |
| 5.2.4.3 植物表达载体pBI121-PmPOD转入农杆菌检测 | 第124-125页 |
| 5.2.5 PmDHN基因植物表达载体构建 | 第125-126页 |
| 5.2.5.1 PmDHN基因全长的克隆 | 第125页 |
| 5.2.5.2 植物表达载体pBI121-PmDHN的构建 | 第125-126页 |
| 5.2.5.3 植物表达载体pBI121-PmDHN转入农杆菌检测 | 第126页 |
| 5.3 讨论与小结 | 第126-128页 |
| 第六章 转基因植株的抗旱性分析 | 第128-142页 |
| 6.1 材料与方法 | 第128-130页 |
| 6.1.1 材料 | 第128页 |
| 6.1.1.1 植物材料 | 第128页 |
| 6.1.1.2 菌株及载体 | 第128页 |
| 6.1.1.3 试验中所用试剂盒与药品 | 第128页 |
| 6.1.2 方法 | 第128-130页 |
| 6.1.2.1 过表达载体的拟南芥转化 | 第128-129页 |
| 6.1.2.2 转基因拟南芥的抗旱表型分析 | 第129页 |
| 6.1.2.3 转基因拟南芥不定根GFP荧光检测 | 第129页 |
| 6.1.2.4 Southern blot分析 | 第129-130页 |
| 6.1.2.5 生理指标测定 | 第130页 |
| 6.1.2.6 数据统计分析 | 第130页 |
| 6.2 结果与分析 | 第130-139页 |
| 6.2.1 转PmGPX6拟南芥抗旱性分析 | 第130-132页 |
| 6.2.1.1 转PmGPX6基因拟南芥的获得与检测 | 第130页 |
| 6.2.1.2 转PmGPX6拟南芥的抗旱性鉴定 | 第130-132页 |
| 6.2.2 转PmPOD拟南芥抗旱性分析 | 第132-135页 |
| 6.2.2.1 转PmPOD基因拟南芥的获得与检测 | 第132页 |
| 6.2.2.2 转PmPOD基因拟南芥的抗旱性鉴定 | 第132-135页 |
| 6.2.3 转PmDHN拟南芥抗旱性分析 | 第135-139页 |
| 6.2.3.1 转PmDHN拟南芥的获得与检测 | 第135页 |
| 6.2.3.2 转PmDHN基因拟南芥的抗旱性鉴定 | 第135-139页 |
| 6.3 讨论与小结 | 第139-142页 |
| 6.3.1 讨论 | 第139-141页 |
| 6.3.2 小结 | 第141-142页 |
| 第七章 研究结论与展望 | 第142-144页 |
| 7.1 主要结论 | 第142页 |
| 7.2 创新点 | 第142-143页 |
| 7.3 展望 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 参考文献 | 第145-155页 |
| 附录 | 第155-156页 |
