| 中文摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语/符号说明 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-27页 |
| 研究现状、成果 | 第18-25页 |
| 研究目的、方法 | 第25-27页 |
| 一、肝癌细胞相关外泌体在肝癌发生和转移中的作用 | 第27-67页 |
| 1.1 对象和方法 | 第27-47页 |
| 1.1.1 肝癌细胞系、实验动物及肝癌患者临床样本 | 第27-28页 |
| 1.1.2 主要仪器和试剂耗材 | 第28-32页 |
| 1.1.3 主要溶液配制 | 第32-34页 |
| 1.1.4 主要引物序列 | 第34-35页 |
| 1.1.5 实验方法 | 第35-47页 |
| 1.2 结果 | 第47-61页 |
| 1.2.1 外泌体的分离和制备 | 第47页 |
| 1.2.2 Rab27a在肝细胞肝癌细胞系中的表达 | 第47-48页 |
| 1.2.3 肝癌临床样本中Rab27a的表达及其与临床预后的关系 | 第48-50页 |
| 1.2.4 内源性抑制Rab27a的表达对肝癌细胞MHCC97H迁移侵袭能力的调控作用 | 第50-52页 |
| 1.2.5 MHCC97H肝癌细胞外泌体对HLE肝癌细胞趋化侵袭能力的调控作用 | 第52-54页 |
| 1.2.6 肝癌细胞通过外泌体的摄取发生上皮间充质转化进而实现促侵袭效应 | 第54-56页 |
| 1.2.7 MHCC97H肝癌细胞外泌体可以调控AML-12 细胞的DNA损伤修复过程 | 第56-57页 |
| 1.2.8 Rab27a降表达促进MHCC97H肝癌细胞在小鼠体内发生肝内播散及肺转移 | 第57-59页 |
| 1.2.9 MHCC97H肝癌细胞外泌体促进小鼠肝脏原位肿瘤的术后复发 | 第59-60页 |
| 1.2.10 肝癌细胞外泌体可以直接诱导正常小鼠肝脏产生肿瘤 | 第60-61页 |
| 1.3 讨论 | 第61-66页 |
| 1.3.1 Rab27a调控肝癌exosomes的分泌 | 第61-62页 |
| 1.3.2 肝癌细胞相关exosomes可以促进肿瘤细胞发生EMT转化 | 第62-63页 |
| 1.3.3 肝癌细胞相关exosomes可以促进肿瘤细胞的侵袭转移能力 | 第63-64页 |
| 1.3.4 肝癌细胞相关exosomes可以调控正常肝细胞的DNA损伤修复 | 第64-66页 |
| 1.4 小结 | 第66-67页 |
| 二、单细胞测序揭示肝癌的不同起源 | 第67-95页 |
| 2.1 对象和方法 | 第68-81页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第68页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂耗材 | 第68-69页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第69-70页 |
| 2.1.4 主要引物序列 | 第70-71页 |
| 2.1.5 实验方法 | 第71-81页 |
| 2.2 结果 | 第81-91页 |
| 2.2.1 骨髓移植小鼠原位肝癌模型的建立 | 第81-83页 |
| 2.2.2 冰冻组织免疫荧光验证肝癌的骨髓起源 | 第83-84页 |
| 2.2.3 小鼠肝脏原位肿瘤单细胞分离 | 第84-85页 |
| 2.2.4 MALBAC单细胞扩增质检与全基因组文库质检 | 第85-86页 |
| 2.2.5 小鼠肝脏肿瘤单细胞基因拷贝数变化揭示小鼠肝癌的起源与进化过程 | 第86-88页 |
| 2.2.6 小鼠肝癌细胞基因拷贝数的变化模式具有异质性 | 第88-89页 |
| 2.2.7 小鼠单细胞CNAs揭示肝癌细胞的进化过程 | 第89页 |
| 2.2.8 基于单细胞CNAs绘制小鼠肝癌模型的Humming distance | 第89-90页 |
| 2.2.9 去除骨髓间充质干细胞对小鼠肝癌发生发展的影响 | 第90-91页 |
| 2.3 讨论 | 第91-94页 |
| 2.3.1 BMSCs的多向分化能力 | 第91页 |
| 2.3.2 多重刺激因子诱发骨髓释放BMSCs参与肿瘤的发生与发展 | 第91-92页 |
| 2.3.3 BMSCs是多种实体肿瘤的最初起源 | 第92-94页 |
| 2.4 小结 | 第94-95页 |
| 三、肝癌干细胞的基因拷贝数变异揭示肝癌的进化过程 | 第95-114页 |
| 3.1 对象和方法 | 第95-99页 |
| 3.1.1 实验动物及肝癌患者临床样本 | 第95-96页 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂耗材 | 第96页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第96页 |
| 3.1.4 主要引物序列 | 第96-97页 |
| 3.1.5 实验方法 | 第97-99页 |
| 3.2 结果 | 第99-107页 |
| 3.2.1 应用干细胞标记物CD44和CD90对肝癌组织中的肿瘤细胞进行分群富集 | 第99-100页 |
| 3.2.2 肝癌组织中的CD44+CD90+细胞群具有体外成球能力 | 第100-101页 |
| 3.2.3 肝癌组织中的CD44+CD90+细胞群具有体外分化能力 | 第101-102页 |
| 3.2.4 CNAs揭示CD44+CD90+肿瘤干细胞在小肝癌发生发展过程中的作用 | 第102-103页 |
| 3.2.5 CNAs揭示CD44+CD90+肿瘤干细胞在肝癌复发过程中的作用 | 第103-104页 |
| 3.2.6 肿瘤单细胞CNAs揭示肝癌患者异质性 | 第104-106页 |
| 3.2.7 肝癌细胞CNAs的复杂程度可作为评估肿瘤恶性程度的潜在指标 | 第106-107页 |
| 3.3 讨论 | 第107-113页 |
| 3.3.1 肝癌干细胞标记物的选择 | 第107-110页 |
| 3.3.2 肝癌干细胞贯穿肝癌发生发展并造成了肝癌的异质性 | 第110-112页 |
| 3.3.3 肝癌患者的单细胞CNAs可作为预测其恶性程度的潜在指标 | 第112-113页 |
| 3.4 小结 | 第113-114页 |
| 四、混合型肝癌的基因组学研究 | 第114-130页 |
| 4.1 对象和方法 | 第114-118页 |
| 4.1.1 临床样本 | 第114-115页 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂耗材 | 第115页 |
| 4.1.3 实验方法 | 第115-118页 |
| 4.2 结果 | 第118-126页 |
| 4.2.1 cHCC-ICC患者的临床分类 | 第118页 |
| 4.2.2 不同类型cHCC-ICC肿瘤样本的研究方案 | 第118-120页 |
| 4.2.3 外显子测序结果揭示cHCC-ICC的高频突变基因 | 第120-121页 |
| 4.2.4 基于测序所得高频突变基因绘制信号通路富集图 | 第121-122页 |
| 4.2.5 通过对23例cHCC-ICC患者进行全基因组拷贝数变化分析 | 第122-123页 |
| 4.2.6 单细胞CNAs揭示cHCC-ICC的肿瘤内部异质性 | 第123-124页 |
| 4.2.7 单细胞PCR突变验证揭示cHCC-ICC肿瘤的单克隆起源 | 第124-126页 |
| 4.3 讨论 | 第126-128页 |
| 4.3.1 cHCC-ICC的研究背景 | 第126-127页 |
| 4.3.2 cHCC-ICC的流行病学特征 | 第127页 |
| 4.3.3 cHCC-ICC的遗传学和分子特征研究 | 第127-128页 |
| 4.4 小结 | 第128-130页 |
| 全文结论 | 第130-131页 |
| 论文创新点 | 第131-133页 |
| 参考文献 | 第133-154页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第154-155页 |
| 综述 肿瘤干细胞与肿瘤微环境在恶性肿瘤发生发展中的作用 | 第155-181页 |
| 综述参考文献 | 第168-181页 |
| 致谢 | 第181-183页 |
| 个人简历 | 第183页 |
