| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 抗菌肽的分类 | 第9-12页 |
| 1.1.1 按其来源进行分类 | 第9-11页 |
| 1.1.2 按其分子结构分类 | 第11-12页 |
| 1.2 抑菌作用机制 | 第12-15页 |
| 1.2.1 作用于细胞膜 | 第12-13页 |
| 1.2.2 作用于细胞壁 | 第13-14页 |
| 1.2.3 抗菌肽与细胞内的生物大分子结合 | 第14-15页 |
| 1.2.4 其他作用机制 | 第15页 |
| 1.3 在食品中的应用 | 第15-16页 |
| 1.3.1 抗菌肽在奶制品中的应用 | 第15页 |
| 1.3.2 抗菌肽在肉制品中的应用 | 第15-16页 |
| 1.3.3 抗菌肽在蔬菜、水果以及饮料中的应用 | 第16页 |
| 1.4 毕赤酵母生产抗菌肽的研究 | 第16页 |
| 1.5 本论文的研究目的、意义及主要研究内容 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-24页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要药品 | 第18-20页 |
| 2.1.3 仪器及设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 相关培养基的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.5 标准储存液的配制 | 第23页 |
| 2.1.6 化转和电转所需试剂的配制 | 第23页 |
| 2.1.7 Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.8 银染主要试剂的配制 | 第24页 |
| 2.1.9 阳离子纯化试剂配制 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 抗菌肽VpDef载体构建 | 第24-25页 |
| 2.2.2 重组质粒的质粒提取 | 第25页 |
| 2.2.3 重组质粒的双酶切验证 | 第25页 |
| 2.2.4 Sac I酶切 | 第25-26页 |
| 2.2.5 DNA产物纯化回收 | 第26页 |
| 2.2.6 制备酵母感受态细胞 | 第26页 |
| 2.2.7 电击转化法把重组质粒转进酵母感受态细胞 | 第26-27页 |
| 2.2.8 阳性转化子的筛选 | 第27-28页 |
| 2.2.9 琼脂糖凝胶电泳验证 | 第28页 |
| 2.2.10 pPICZαA-VpDef转化子的诱导表达 | 第28页 |
| 2.2.11 Tricine-SDS-PAGE检测蛋白是否表达及表达量 | 第28-29页 |
| 2.2.12 银染 | 第29页 |
| 2.2.13 总蛋白表达量的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.14 优化pPICZαA-VpDef诱导表达条件 | 第30页 |
| 2.2.15 重组抗菌肽VpDef的阳离子纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.16 最小抑制浓度MIC的测定 | 第31页 |
| 2.2.17 抗菌肽VpDef活力测定-抑菌圈实验 | 第31页 |
| 2.2.18 重组抗菌肽VpDef特性研究 | 第31-32页 |
| 2.2.19 数据分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-52页 |
| 3.1 抗菌肽理化性质与结构分析 | 第33-37页 |
| 3.1.1 抗菌肽理化性质分析 | 第33-34页 |
| 3.1.2 抗菌肽二级结构预测 | 第34-35页 |
| 3.1.3 抗菌肽疏水性分析 | 第35-36页 |
| 3.1.4 抗菌肽空间结构模拟 | 第36页 |
| 3.1.5 N-端两亲性分析 | 第36-37页 |
| 3.2 重组抗菌肽VpDef转化进毕赤酵母 | 第37-42页 |
| 3.2.1 重组抗菌肽VpDef载体构建 | 第37-38页 |
| 3.2.2 重组质粒测序验证 | 第38-39页 |
| 3.2.3 重组质粒的双酶切验证 | 第39-40页 |
| 3.2.4 重组质粒的线性化 | 第40页 |
| 3.2.5 目的基因转化进毕赤酵母 | 第40-41页 |
| 3.2.6 PCR筛选阳性克隆子 | 第41-42页 |
| 3.3 pPICZαA-VpDef诱导表达及条件的优化 | 第42-45页 |
| 3.3.1 pPICZαA-VpDef诱导表达 | 第42页 |
| 3.3.2 蛋白标准曲线 | 第42-43页 |
| 3.3.3 诱导表达条件的优化 | 第43-45页 |
| 3.4 纯化及特性研究 | 第45-52页 |
| 3.4.1 阳离子纯化实验 | 第45页 |
| 3.4.2 阳离子纯化产率 | 第45-46页 |
| 3.4.3 MIC测定 | 第46-48页 |
| 3.4.4 抑菌圈实验 | 第48-49页 |
| 3.4.5 抗菌肽VpDef的稳定性研究 | 第49-52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 5 展望 | 第53-54页 |
| 6 参考文献 | 第54-63页 |
| 7 攻读硕士研究生学位期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 8 致谢 | 第64页 |
