| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-16页 |
| 1.1 抗菌肽的概述 | 第9页 |
| 1.2 抗菌肽的作用机制 | 第9-10页 |
| 1.2.1 破坏细胞膜 | 第9-10页 |
| 1.2.2 与细胞内生物大分子发生作用 | 第10页 |
| 1.3 抗菌肽生产的策略 | 第10-12页 |
| 1.3.1 天然原料提取 | 第10-11页 |
| 1.3.2 化学合成 | 第11页 |
| 1.3.3 异源表达 | 第11-12页 |
| 1.4 抗菌肽的应用现状 | 第12-13页 |
| 1.4.1 抗菌肽在转基因工程方面的应用 | 第12-13页 |
| 1.4.2 抗菌肽在药物开发方面的应用 | 第13页 |
| 1.4.3 抗菌肽在畜牧养殖业方面的应用 | 第13页 |
| 1.4.4 抗菌肽在食品行业的应用 | 第13页 |
| 1.5 莱茵衣藻系统表达抗菌肽 | 第13-14页 |
| 1.5.1 莱茵衣藻的核转化方法 | 第13-14页 |
| 1.5.2 莱茵衣藻表达抗菌肽 | 第14页 |
| 1.6 细菌素Bacteriocin LS2的简介 | 第14-15页 |
| 1.7 本课题的研究目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-26页 |
| 2.1.1 目的基因、引物、载体、菌株、藻种 | 第16-17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17-20页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基的配置 | 第21-22页 |
| 2.1.5 主要溶液的配置 | 第22-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-47页 |
| 2.2.1 串联抗菌肽3×Bacteriocin LS2基因的获得及蛋白理化性质的分析 | 第26-33页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第33-38页 |
| 2.2.3 获得表达串联抗菌肽3×Bacteriocin LS2的转基因藻种 | 第38-45页 |
| 2.2.4 串联抗菌肽3×BacteriocinLS2的亲和纯化 | 第45页 |
| 2.2.5 串联抗菌肽3×BacteriocinLS2的活性鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.6 最小抑制浓度MIC的测定 | 第46页 |
| 2.2.7 串联抗菌肽3×BacteriocinLS2特性研究 | 第46-47页 |
| 3 结果与讨论 | 第47-72页 |
| 3.1 串联抗菌肽3× Bacteriocin LS2的性质分析 | 第47-48页 |
| 3.1.1 串联抗菌肽3× Bacteriocin LS2的理化性质分析 | 第47页 |
| 3.1.2 串联抗菌肽3×Bacteriocin LS2的亲水性分析 | 第47-48页 |
| 3.2 串联抗菌肽3×Bacteriocin LS2的结构分析 | 第48-49页 |
| 3.2.1 串联抗菌肽3×Bacteriocin LS2的一级结构分析 | 第48页 |
| 3.2.2 串联抗菌肽3×Bacteriocin LS2的二级结构分析 | 第48-49页 |
| 3.3 目的基因3×Bacteriocin LS2的获得 | 第49-55页 |
| 3.4 表达载体的构建 | 第55-62页 |
| 3.4.1 构建载体pBSK-3'UTR | 第56-58页 |
| 3.4.2 构建pBSK-rbcs2-ble-FMDV2APRO-3'UTR | 第58-60页 |
| 3.4.3 构建载体pBSK-rbcs2-ble-FMDV2APRO-HA-6×His-3'UTR | 第60-61页 |
| 3.4.4 构建载体pBSK-rbcs2-ble-FMDV2APRO-HA-6×His-3×LS2-3'UTR | 第61-62页 |
| 3.5 表达载体的线性化 | 第62页 |
| 3.6 莱茵衣藻的转化 | 第62-63页 |
| 3.7 转基因藻种的Western blotting分析 | 第63-64页 |
| 3.8 转基因藻种的表达量分析 | 第64-65页 |
| 3.8.1 鉴定表达量最高的转基因藻种 | 第64-65页 |
| 3.8.2 测定转基因藻种中目的蛋白的表达量 | 第65页 |
| 3.9 转基因藻种遗传稳定性的鉴定 | 第65-66页 |
| 3.10 串联抗菌肽3×Bacteriocin LS2的亲和纯化 | 第66-67页 |
| 3.11 抗菌肽抑菌活性的分析 | 第67-68页 |
| 3.12 最小抑制浓度MIC(μg/mL)的测定 | 第68-69页 |
| 3.13 抗菌肽的稳定性研究 | 第69-72页 |
| 3.13.1 3×Bacteriocin LS2对温度的稳定性研究 | 第69-70页 |
| 3.13.2 3×Bacteriocin LS2对PH的稳定性研究 | 第70-71页 |
| 3.13.3 3×Bacteriocin LS2对蛋白酶的稳定性研究 | 第71-72页 |
| 4 结论 | 第72-73页 |
| 5 展望 | 第73-74页 |
| 6 参考文献 | 第74-80页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第80-81页 |
| 8 致谢 | 第81页 |
