| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 引物序列 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| 1.1 研究意义 | 第10页 |
| 1.2 研究背景 | 第10-15页 |
| 1.2.1 木质素概述 | 第11-12页 |
| 1.2.2 咖啡酸-O-甲基转移酶的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2.3 咖啡酸-O-甲基转移酶参与木质素合成中的代谢途径 | 第13-14页 |
| 1.2.4 咖啡酸-O-甲基转移酶基因的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.3 研究内容 | 第15页 |
| 1.4 技术路线 | 第15-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第17页 |
| 2.1.3 实验试剂及配制 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-32页 |
| 2.2.1 LgCOMT基因的克隆 | 第18-23页 |
| 2.2.2 LgCOMT基因的生物信息学分析 | 第23-24页 |
| 2.2.3 兴安落叶松COMT基因的组织表达分析 | 第24-25页 |
| 2.2.4 兴安落叶松COMT的原核表达分析 | 第25-28页 |
| 2.2.5 pBI101-LgCOMT植物双元表达载体的构建 | 第28-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-45页 |
| 3.1 LgCOMT基因的克隆 | 第32-34页 |
| 3.1.1 LgCOMT基因的中间片段的克隆 | 第32页 |
| 3.1.2 LgCOMT基因末端序列的克隆 | 第32-33页 |
| 3.1.3 LgCOMT cDNA和DNA全长序列的克隆 | 第33-34页 |
| 3.2 LgCOMT基因序列的生物信息学分析 | 第34-39页 |
| 3.2.1 开放阅读框及蛋白质性质预测 | 第34-35页 |
| 3.2.2 二级结构预测 | 第35-36页 |
| 3.2.3 亚细胞定位预测 | 第36页 |
| 3.2.4 蛋白质跨膜结构域预测 | 第36页 |
| 3.2.5 保守结构域分析 | 第36-37页 |
| 3.2.6 LgCOMT同源性分析 | 第37-39页 |
| 3.3 兴安落叶松LgCOMT基因的组织表达分析 | 第39页 |
| 3.4 pET32a-LgCOMT表达载体的构建 | 第39-42页 |
| 3.4.1 LgCOMT ORF的扩增 | 第39-40页 |
| 3.4.2 pMD19-T-LgCOMT和pET32a载体的酶切 | 第40-41页 |
| 3.4.3 重组质粒鉴定 | 第41页 |
| 3.4.4 LgCOMT诱导表达的SDS-PAGE检测 | 第41-42页 |
| 3.5 植物双元表达载体pBI101-LgCOMT的构建 | 第42-45页 |
| 3.5.1 pMD19-T-LgCOMT和pBI101-km-35S::Gus-Hm载体的酶切 | 第42-43页 |
| 3.5.2 重组质粒鉴定 | 第43-44页 |
| 3.5.3 转化农瘤秆菌及鉴定 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
