| 缩略词 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 第一章 利用CRISPR/Cas9基因打靶技术构建CPS1-2atdTomato-HepG2/LO2/ESCs细胞系 | 第18-40页 |
| 一、实验材料 | 第18-20页 |
| 1、细胞和质粒 | 第18页 |
| 2、主要仪器与试剂 | 第18-20页 |
| 3、试剂的配制 | 第20页 |
| 二、实验方法 | 第20-33页 |
| 1、构建携带靶向CPS1基因的sgRNA | 第20-23页 |
| 2、构建打靶载体pET32-CPSLR-2A-tdTomato | 第23-27页 |
| 3、细胞培养 | 第27-28页 |
| 4、免疫荧光鉴定转染后具有G418抗性的细胞 | 第28页 |
| 5、流式分选转染后的细胞 | 第28-30页 |
| 6、对流式分选所得细胞克隆的DNA进行鉴定 | 第30-31页 |
| 7、对流式分选所得细胞克隆进行免疫荧光鉴定 | 第31页 |
| 8、实时定量检测流式分选所得细胞克隆的基因表达情况 | 第31页 |
| 9、对流式分选所得细胞克隆的ALB分泌量进行测定 | 第31-32页 |
| 10、对流式分选所得细胞克隆的CYP450酶活性检测 | 第32页 |
| 11、对转染了CPS1-2atdTomato的ESCs进行肝向诱导分化培养 | 第32-33页 |
| 三、实验结果 | 第33-37页 |
| 四、讨论 | 第37-40页 |
| 第二章 小分子高通量筛选平台的建立及其应用 | 第40-54页 |
| 一、实验材料 | 第40-41页 |
| 1、细胞和药物 | 第40页 |
| 2、主要仪器与试剂 | 第40-41页 |
| 3、试剂的配制 | 第41页 |
| 二、实验方法 | 第41-44页 |
| 1、细胞处理 | 第41-42页 |
| 2、SiRNA处理细胞 | 第42页 |
| 3、细胞培养基中尿素含量检测 | 第42页 |
| 4、细胞培养基中铵离子浓度检测 | 第42-43页 |
| 5、CCK8检测细胞增殖-毒性实验 | 第43页 |
| 6、实时定量PCR检测NaPB和白藜芦醇对肝功能性基因的影响 | 第43页 |
| 7、Western Blotting检测siCPS1和白藜芦醇对HepG2细胞中CPS1蛋白表达的影响 | 第43页 |
| 8、抑制性小分子对细胞形态及基因表达的影响 | 第43-44页 |
| 三、实验结果 | 第44-51页 |
| 四、讨论 | 第51-54页 |
| 第三章 总结 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 个人简历 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
