中文摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
一 引言 | 第10-14页 |
二 材料和方法 | 第14-32页 |
1 实验材料 | 第14-15页 |
1.1 实验动物 | 第14页 |
1.2 细胞系 | 第14页 |
1.3 试剂和抗体 | 第14-15页 |
1.4 病原体 | 第15页 |
1.5 主要设备及软件 | 第15页 |
2 试剂配制 | 第15-18页 |
2.1 琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第15-16页 |
2.2 琼脂糖凝胶 | 第16页 |
2.3 磷酸盐缓冲液 | 第16页 |
2.4 0.5%Triton X100 | 第16页 |
2.5 10%过硫酸铵 | 第16页 |
2.6 10%十二烷基磺酸钠 | 第16页 |
2.7 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳4×分离胶缓冲液 | 第16页 |
2.8 SDS-PAGE 4×浓缩胶缓冲液 | 第16页 |
2.9 Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液 | 第16页 |
2.10 Tris-甘氨酸蛋白转膜缓冲液 | 第16页 |
2.11 丽春红染液 | 第16-17页 |
2.12 Tris洗涤缓冲液 | 第17页 |
2.13 封闭液 | 第17页 |
2.14 0.05% Triton X100 | 第17页 |
2.15 LB培养基 | 第17页 |
2.16 氨苄青霉素溶液 | 第17页 |
2.17 细菌培养板 | 第17页 |
2.18 脑心浸液培养基 | 第17页 |
2.19 BHI培养板 | 第17页 |
2.20 流式细胞分析用缓冲液 | 第17-18页 |
2.21 0.5mol/L EDTA | 第18页 |
2.22 NETN缓冲液 | 第18页 |
2.23 银染固定液 | 第18页 |
2.24 银染敏化液 | 第18页 |
2.25 银染液 | 第18页 |
2.26 银染显色液 | 第18页 |
2.27 银染终止液 | 第18页 |
2.28 染色质免疫共沉淀洗脱液 | 第18页 |
3 实验方法 | 第18-32页 |
3.1 Car6敲除小鼠的获得和鉴定 | 第18-19页 |
3.2 Car6-b敲除RAW264.7细胞的获得和鉴定 | 第19-20页 |
3.3 小鼠原代腹腔巨噬细胞的募集与分离 | 第20页 |
3.4 小鼠骨髓来源的巨噬细胞和树突状细胞的培养 | 第20-21页 |
3.5 细胞RNA干扰技术 | 第21页 |
3.6 RNA提取与实时定量PCR(Q-PCR) | 第21-23页 |
3.7 Western blot十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫沉淀 | 第23-24页 |
3.8 细胞因子ELISA检测 | 第24-25页 |
3.9 流式细胞术 | 第25页 |
3.10 小鼠荷菌量实验 | 第25页 |
3.11 免疫荧光 | 第25页 |
3.12 载体构建 | 第25-28页 |
3.13 特定位点突变载体构建方法 | 第28-29页 |
3.14 荧光素酶报告基因检测 | 第29页 |
3.15 染色质免疫沉淀实验 | 第29-30页 |
3.16 细胞内pH值检测 | 第30页 |
3.17 染色质开放程度实验 | 第30-31页 |
3.18 银染-质谱实验 | 第31页 |
3.19 统计学分析 | 第31-32页 |
三 实验结果 | 第32-61页 |
1 Car6-b主要表达在巨噬细胞且在天然免疫刺激下表达上调 | 第32-35页 |
2 Car6-b选择性促进天然免疫刺激触发的IL-12产生 | 第35-45页 |
3 Car6-b通过正向调节IL-12产生而参与小鼠抗细菌感染天然免疫反应 | 第45-47页 |
4 Car6-b选择性促进IL-12产生并不依赖其酶活性以及NF-κB和MAPK信号通路活化 | 第47-51页 |
5 Car6-b通过促进c-Rel与Il12b启动子区的结合进而促进IL-12的产生 | 第51-54页 |
6 Car6-b与PRMT5结合以促进Il12b启动子区染色质开放从而促进c-Rel与Il12b的结合 | 第54-61页 |
四 讨论 | 第61-65页 |
五 结论 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-71页 |
英文缩略词表 | 第71-74页 |
综述 | 第74-92页 |
参考文献 | 第85-92页 |
个人简历 | 第92-93页 |
致谢 | 第93-96页 |