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核定位碳酸酐酶6B通过PRMT5表观机制促进天然免疫白细胞介素12产生的研究

中文摘要第6-8页
Abstract第8-9页
一 引言第10-14页
二 材料和方法第14-32页
    1 实验材料第14-15页
        1.1 实验动物第14页
        1.2 细胞系第14页
        1.3 试剂和抗体第14-15页
        1.4 病原体第15页
        1.5 主要设备及软件第15页
    2 试剂配制第15-18页
        2.1 琼脂糖凝胶电泳缓冲液第15-16页
        2.2 琼脂糖凝胶第16页
        2.3 磷酸盐缓冲液第16页
        2.4 0.5%Triton X100第16页
        2.5 10%过硫酸铵第16页
        2.6 10%十二烷基磺酸钠第16页
        2.7 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳4×分离胶缓冲液第16页
        2.8 SDS-PAGE 4×浓缩胶缓冲液第16页
        2.9 Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液第16页
        2.10 Tris-甘氨酸蛋白转膜缓冲液第16页
        2.11 丽春红染液第16-17页
        2.12 Tris洗涤缓冲液第17页
        2.13 封闭液第17页
        2.14 0.05% Triton X100第17页
        2.15 LB培养基第17页
        2.16 氨苄青霉素溶液第17页
        2.17 细菌培养板第17页
        2.18 脑心浸液培养基第17页
        2.19 BHI培养板第17页
        2.20 流式细胞分析用缓冲液第17-18页
        2.21 0.5mol/L EDTA第18页
        2.22 NETN缓冲液第18页
        2.23 银染固定液第18页
        2.24 银染敏化液第18页
        2.25 银染液第18页
        2.26 银染显色液第18页
        2.27 银染终止液第18页
        2.28 染色质免疫共沉淀洗脱液第18页
    3 实验方法第18-32页
        3.1 Car6敲除小鼠的获得和鉴定第18-19页
        3.2 Car6-b敲除RAW264.7细胞的获得和鉴定第19-20页
        3.3 小鼠原代腹腔巨噬细胞的募集与分离第20页
        3.4 小鼠骨髓来源的巨噬细胞和树突状细胞的培养第20-21页
        3.5 细胞RNA干扰技术第21页
        3.6 RNA提取与实时定量PCR(Q-PCR)第21-23页
        3.7 Western blot十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫沉淀第23-24页
        3.8 细胞因子ELISA检测第24-25页
        3.9 流式细胞术第25页
        3.10 小鼠荷菌量实验第25页
        3.11 免疫荧光第25页
        3.12 载体构建第25-28页
        3.13 特定位点突变载体构建方法第28-29页
        3.14 荧光素酶报告基因检测第29页
        3.15 染色质免疫沉淀实验第29-30页
        3.16 细胞内pH值检测第30页
        3.17 染色质开放程度实验第30-31页
        3.18 银染-质谱实验第31页
        3.19 统计学分析第31-32页
三 实验结果第32-61页
    1 Car6-b主要表达在巨噬细胞且在天然免疫刺激下表达上调第32-35页
    2 Car6-b选择性促进天然免疫刺激触发的IL-12产生第35-45页
    3 Car6-b通过正向调节IL-12产生而参与小鼠抗细菌感染天然免疫反应第45-47页
    4 Car6-b选择性促进IL-12产生并不依赖其酶活性以及NF-κB和MAPK信号通路活化第47-51页
    5 Car6-b通过促进c-Rel与Il12b启动子区的结合进而促进IL-12的产生第51-54页
    6 Car6-b与PRMT5结合以促进Il12b启动子区染色质开放从而促进c-Rel与Il12b的结合第54-61页
四 讨论第61-65页
五 结论第65-66页
参考文献第66-71页
英文缩略词表第71-74页
综述第74-92页
    参考文献第85-92页
个人简历第92-93页
致谢第93-96页

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