| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 酶-前药疗法的发展现状 | 第11-16页 |
| 1.1.1 酶-前药疗法的概念 | 第11页 |
| 1.1.2 酶-前药疗法的分类 | 第11页 |
| 1.1.3 酶-前药疗法中前药的设计 | 第11-12页 |
| 1.1.4 酶-前药疗法中酶的选择 | 第12-13页 |
| 1.1.5 特定酶-前药组合 | 第13-16页 |
| 1.1.6 酶-前药疗法的优势及不足 | 第16页 |
| 1.2 pH指示剂的研究背景及在生物领域中的应用 | 第16-21页 |
| 1.2.1 pH指示剂的分类 | 第16-20页 |
| 1.2.2 pH指示剂在生物领域的重要作用 | 第20-21页 |
| 1.3 本课题的意义、目的及研究思路 | 第21-22页 |
| 第2章 制备pH敏感的比率荧光蛋白ratiometric pHluorins | 第22-37页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第23-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 本章实验流程 | 第26页 |
| 2.2.2 构建融合表达质粒 | 第26页 |
| 2.2.3 融合蛋白的表达与纯化 | 第26-31页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第31-36页 |
| 2.3.1 融合蛋白的表达及纯化 | 第31-33页 |
| 2.3.2 Bradford法测定蛋白浓度 | 第33页 |
| 2.3.3 蛋白性质的研究 | 第33-36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 第3章 pHluorins用于检测HRP催化IAA反应中pH变化的研究 | 第37-54页 |
| 3.1 材料 | 第37-41页 |
| 3.1.1 质粒、菌株以及细胞株 | 第37页 |
| 3.1.2 试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第38页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第38-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 本章实验流程 | 第41页 |
| 3.2.2 HRP酶活检测 | 第41-43页 |
| 3.2.3 HPLC检测HRP-IAA反应产物的生成 | 第43页 |
| 3.2.4 精密pH计检测pHluorins存在下HRP-IAA反应的pH的变化 | 第43-44页 |
| 3.2.5 用荧光酶标仪检测pHluorins存在下HRP-IAA反应的pH变化 | 第44页 |
| 3.2.6 癌细胞培养 | 第44-45页 |
| 3.2.7 HRP-IAA反应对癌细胞的杀伤作用 | 第45页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第45-52页 |
| 3.3.1 HRP酶活性质方面的研究结果 | 第45-47页 |
| 3.3.2 HPLC检测HRP-IAA反应产物的生成 | 第47-48页 |
| 3.3.3 用精密pH计以及蛋白pHluorins检测HRP-IAA反应的pH值变化 | 第48-50页 |
| 3.3.4 HRP-IAA对Bcap-37细胞的杀伤作用 | 第50-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-54页 |
| 第4章 HRP与pHluorins交联产物用于HRP-IAA反应的研究 | 第54-60页 |
| 4.1 材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 质粒、菌株和细胞株 | 第54页 |
| 4.1.2 试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第54-55页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 4.2.1 本章实验流程 | 第55-56页 |
| 4.2.2 EDC-NHS交联蛋白pHluorins与HRP | 第56页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第56-58页 |
| 4.3.1 SDS-PAGE检测交联产物 | 第56-57页 |
| 4.3.2 检测交联产物的酶活 | 第57页 |
| 4.3.3 研究交联产物的荧光性质 | 第57-58页 |
| 4.3.4 用交联产物检测HRP-IAA反应 | 第58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第5章 利用细胞模型通过pHluorins及交联产物监测HRP-IAA反应 | 第60-65页 |
| 5.1 材料 | 第60页 |
| 5.1.1 质粒、菌株和细胞株 | 第60页 |
| 5.1.2 试剂 | 第60页 |
| 5.1.3 主要实验仪器 | 第60页 |
| 5.1.4 试剂配制 | 第60页 |
| 5.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 5.2.1 本章实验流程 | 第60-61页 |
| 5.2.2 纯化后的pHluorins检测细胞存在下的HRP-IAA反应 | 第61页 |
| 5.2.3 细胞存在下pHluorins与HRP交联产物用于检测HRP-IAA反应 | 第61-62页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第62-64页 |
| 5.3.1 细胞存在下用pHluorins检测HRP-IAA反应 | 第62-63页 |
| 5.3.2 细胞存在下pHluorins与HRP交联产物用于检测HRP-IAA反应 | 第63-64页 |
| 5.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第6章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 6.1 结论 | 第65页 |
| 6.2 展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 在校期间科研成果 | 第77页 |
