| 摘要 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-16页 |
| 1 成肌细胞融合的研究进展 | 第9-13页 |
| 1.1 成肌细胞融合的概述 | 第9-10页 |
| 1.2 成肌细胞融合信号通路及相关基因 | 第10-13页 |
| 2 Myomaker基因的研究进展 | 第13-16页 |
| 2.1 Myomaker基因的发现 | 第13-14页 |
| 2.2 Myomaker基因的结构分布及其同源性分析 | 第14-15页 |
| 2.3 Myomaker基因的生物学功能 | 第15-16页 |
| 本研究的立项依据和研究意义 | 第16-17页 |
| 试验一 小鼠Myomaker基因CDS区的克隆 | 第17-34页 |
| 1 试验材料 | 第17-19页 |
| 1.1 细胞 | 第17页 |
| 1.2 细胞试验相关试剂 | 第17页 |
| 1.3 分子试验相关试剂 | 第17-18页 |
| 1.4 仪器与设备 | 第18-19页 |
| 2 试验方法 | 第19-27页 |
| 2.1 C2C12细胞的培养 | 第19-21页 |
| 2.2 细胞的诱导分化 | 第21页 |
| 2.3 细胞RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.4 反转录 | 第22页 |
| 2.5 小鼠Myomaker基因CDS区的扩增及克隆 | 第22-25页 |
| 2.6 目的片段与质粒载体pMD18-T Vector之间的连接反应 | 第25页 |
| 2.7 转化 | 第25页 |
| 2.8 重组质粒的鉴定 | 第25-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-32页 |
| 3.1 小鼠C2C12成肌细胞的培养 | 第27-29页 |
| 3.2 不同组小鼠细胞RNA提取结果 | 第29页 |
| 3.3 小鼠Myomaker基因CDS区PCR扩增结果 | 第29-30页 |
| 3.4 pMD18T-Myomaker载体构建的双酶切鉴定结果 | 第30-31页 |
| 3.5 小鼠Myomaker基因CDS区的测序结果及序列比对 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 4.1 小鼠C2C12成肌细胞的体外诱导分化 | 第32页 |
| 4.2 载体构建过程中的常见问题 | 第32-33页 |
| 4.3 关于基因突变 | 第33-34页 |
| 试验二 pcDNA3.1(+)-Myomaker真核表达载体的构建 | 第34-41页 |
| 1 试验材料 | 第34-35页 |
| 1.1 菌株及质粒载体 | 第34页 |
| 1.2 分子试验和生化试剂 | 第34页 |
| 1.3 常用试验试剂配制 | 第34页 |
| 1.4 仪器与设备 | 第34-35页 |
| 2 试验方法 | 第35-39页 |
| 2.1 小鼠Myomaker基因CDS区的扩增 | 第35-36页 |
| 2.2 连接 | 第36-37页 |
| 2.3 转化和涂板 | 第37页 |
| 2.4 重组质粒的鉴定 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-40页 |
| 3.1 PCR扩增结果 | 第39页 |
| 3.2 酶切和测序鉴定结果 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 试验三 Myomaker基因过表达对其他膜融合相关基因表达的影响 | 第41-60页 |
| 1 试验材料 | 第41-42页 |
| 1.1 动物细胞与质粒 | 第41页 |
| 1.2 细胞培养试剂 | 第41页 |
| 1.3 分子试剂 | 第41页 |
| 1.4 常用试剂与缓冲液的配制 | 第41页 |
| 1.5 仪器与设备 | 第41-42页 |
| 2 试验方法 | 第42-46页 |
| 2.1 小鼠C2C12成肌细胞的培养 | 第42页 |
| 2.2 无内毒素质粒小提 | 第42-43页 |
| 2.3 小鼠C2C12成肌细胞的转染 | 第43页 |
| 2.4 转染后细胞RNA的提取 | 第43页 |
| 2.5 RNA电泳 | 第43页 |
| 2.6 反转录 | 第43页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR | 第43-45页 |
| 2.8 数据处理与统计 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-57页 |
| 3.1 细胞转染效率 | 第46页 |
| 3.2 细胞总RNA提取结果 | 第46-47页 |
| 3.3 基因扩增动力学曲线 | 第47-48页 |
| 3.4 不同转染组Myomaker mRNA过表达结果 | 第48-49页 |
| 3.5 Myomaker基因过表达对膜融合相关基因表达的影响 | 第49-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 Myomaker基因过表达效果 | 第57页 |
| 4.2 Myomaker基因过表达对融合相关基因表达的影响 | 第57-60页 |
| 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| Abstract | 第66-67页 |
| 致谢 | 第68页 |
