| 摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 黑色素细胞及其调节机制 | 第10-13页 |
| 1.1 黑色素细胞的发育 | 第10页 |
| 1.2 黑色素的生成 | 第10-12页 |
| 1.3 黑色素生成相关的信号转导通路 | 第12-13页 |
| 1.3.1 cAMP/PKA信号通路 | 第12页 |
| 1.3.2 NO/cGMP/PKG信号通路 | 第12页 |
| 1.3.3 DAG/PKC信号通路 | 第12-13页 |
| 1.3.4 MAPK级联途径 | 第13页 |
| 2 黑色素生成相关基因的研究 | 第13-16页 |
| 2.1 黑素皮质素受体1 | 第13-15页 |
| 2.2 小眼畸形相关转录因子 | 第15页 |
| 2.3 酪氨酸酶 | 第15-16页 |
| 3 α-促黑素细胞激素与黑色素生成 | 第16-17页 |
| 3.1 α-MSH的分子结构及来源 | 第16页 |
| 3.2 α-MSH调控黑色素合成的机理 | 第16-17页 |
| 3.3 α-MSH的研究进展 | 第17页 |
| 4 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 材料和方法 | 第19-33页 |
| 1 绵羊黑色素细胞培养 | 第19-21页 |
| 1.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 1.1.1 实验样本 | 第19页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第19页 |
| 1.1.3 主要试剂和耗材 | 第19页 |
| 1.1.4 主要溶液的配制 | 第19-20页 |
| 1.2 实验方法 | 第20-21页 |
| 1.2.1 绵羊黑色素细胞复苏 | 第20页 |
| 1.2.2 绵羊黑色素细胞传代 | 第20页 |
| 1.2.3 绵羊黑色素细胞冻存 | 第20-21页 |
| 2 细胞总RNA提取和qRT-PCR | 第21-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验样本 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂和耗材 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 绵羊黑色素细胞总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.4 荧光定量PCR反应体系及程序 | 第24-25页 |
| 2.2.5 数据处理和统计分析 | 第25页 |
| 3 Western Blot检测蛋白表达差异 | 第25-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 3.1.1 实验样本 | 第25页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第25页 |
| 3.1.3 主要试剂和耗材 | 第25-26页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-29页 |
| 3.2.1 绵羊黑色素细胞总蛋白的提取 | 第26-27页 |
| 3.2.2 考马斯亮蓝染色液检测总蛋白 | 第27-28页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE电泳 | 第28页 |
| 3.2.4 转膜 | 第28页 |
| 3.2.5 免疫反应 | 第28-29页 |
| 3.2.6 化学发光 | 第29页 |
| 3.2.7 凝胶图像分析 | 第29页 |
| 4 黑色素细胞中cAMP和cGMP含量的测定 | 第29-31页 |
| 4.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 4.1.1 实验样本 | 第29页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第29页 |
| 4.1.3 主要试剂和耗材 | 第29页 |
| 4.1.4 主要溶液的配制 | 第29-30页 |
| 4.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 4.2.1 ELISA试剂盒检测cAMP和cGMP含量 | 第30-31页 |
| 5 黑色素的提取和含量的测定 | 第31-33页 |
| 5.1 实验材料 | 第31页 |
| 5.1.1 实验样本 | 第31页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第31页 |
| 5.1.3 主要试剂和耗材 | 第31页 |
| 5.1.4 主要溶液的配制 | 第31页 |
| 5.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 5.2.1 黑色素的提取和含量测定 | 第31-33页 |
| 试验结果 | 第33-46页 |
| 1 不同浓度α-MSH对绵羊皮肤黑色素细胞形态学影响 | 第33-34页 |
| 2 不同浓度α-MSH对MC1R、MITF、TYR基因mRNA表达差异 | 第34-38页 |
| 2.1 总RNA质量鉴定 | 第34页 |
| 2.2 qRT-PCR实验结果 | 第34-36页 |
| 2.3 不同浓度α-MSH对MC1R、MITF、TYR基因在转录水平的表达差异. | 第36-38页 |
| 3 不同浓度α-MSH对MC1R、MITF、TYR和TYRP2蛋白水平表达差异 | 第38-42页 |
| 4 不同浓度α-MSH对黑色素细胞内cAMP和cGMP含量影响 | 第42-44页 |
| 5 不同浓度α-MSH对黑色素细胞中黑色素含量的影响 | 第44-46页 |
| 讨论 | 第46-50页 |
| 1 不同浓度α-MSH对绵羊黑色素细胞增殖的影响 | 第46-47页 |
| 2 不同浓度α-MSH对绵羊黑色素合成的影响 | 第47-50页 |
| 2.1 不同浓度α-MSH对绵羊黑色素生成相关基因和蛋白影响 | 第47-48页 |
| 2.2 不同浓度α-MSH对cAMP和cGMP影响 | 第48页 |
| 2.3 不同浓度α-MSH对黑色素生成的影响 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| Abstract | 第58-59页 |
| 致谢 | 第60页 |
