| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 1. 引言 | 第13-23页 |
| ·黄栌枯萎病 | 第13页 |
| ·黄栌枯萎病的病原及危害 | 第13页 |
| ·黄栌枯萎病的管理和防治 | 第13-14页 |
| ·大丽轮枝菌的微菌核 | 第14-16页 |
| ·微菌核的作用 | 第14-15页 |
| ·微菌核的形成过程研究 | 第15页 |
| ·参与调控微菌核形成相关基因的鉴定及功能研究 | 第15-16页 |
| ·MAPK途径的简介和与微菌核形成的相关研究 | 第16-19页 |
| ·黑色素的合成和微菌核形成 | 第19-21页 |
| ·研究目的与意义 | 第21-22页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第22-23页 |
| 2. 研究材料与方法 | 第23-36页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要溶液、试剂和培养基 | 第23页 |
| ·黄栌枯萎病菌Hog1基因的敲除 | 第23-27页 |
| ·Hog1基因的生物信息学分析 | 第23页 |
| ·Hog1基因敲除载体的构建 | 第23-25页 |
| ·大丽轮枝菌PEG介导的原生质体遗传转化 | 第25页 |
| ·Hog1突变体的验证 | 第25-27页 |
| ·Hog1突变体的表型观察 | 第27-29页 |
| ·Hog1突变体PDA上的表型分析 | 第27页 |
| ·Hog1突变体在渗透胁迫条件下的表型分析 | 第27-28页 |
| ·Hog1突变体在过氧化氢及CM-C、CM-N的胁迫条件下的生长情况 | 第28页 |
| ·Hog1突变体在刚果红、CuSO4的胁迫条件下的生长情况 | 第28页 |
| ·Hog1突变体在农药多菌灵和甲基硫菌灵的胁迫条件下地生长情况 | 第28页 |
| ·农药咯菌腈对Hog1突变体胁迫性观察 | 第28页 |
| ·Hog1突变体微菌核形成观察 | 第28-29页 |
| ·Melanin家族基因在Hog1突变体中的表达情况 | 第29-31页 |
| ·Hog1突变体和野生型的RNA提取 | 第29页 |
| ·Hog1突变体和野生型的反转录 | 第29-30页 |
| ·实时荧光定量PCR(RT-PCR) | 第30-31页 |
| ·大丽轮枝菌dsRNA干扰的基因沉默系统的建立 | 第31-34页 |
| ·沉默载体的构建 | 第31-33页 |
| ·PEG介导的原生质体转化 | 第33页 |
| ·GFP沉默转化子的荧光观察 | 第33页 |
| ·GFP沉默突变体的RNA提取 | 第33页 |
| ·GFP沉默突变体的RT-PCR表达量鉴定 | 第33页 |
| ·GFP沉默突变体的GFP拷贝数分析 | 第33-34页 |
| ·Melanin家族基因的沉默 | 第34-36页 |
| ·Melanin家族基因的沉默载体构建 | 第34页 |
| ·PEG介导的原生质体转化 | 第34页 |
| ·Melanin家族沉默转化子的表型分析以及基因表达量 | 第34-35页 |
| ·利用黑色素抑制剂分析Melanin家族基因对微菌核形成的影响 | 第35-36页 |
| 3. 结果 | 第36-54页 |
| ·VdHog1基因的鉴定和系统发育树分析 | 第36-37页 |
| ·VdHog1基因的敲除 | 第37-39页 |
| ·VdHog1基因敲除载体的构建 | 第37页 |
| ·大丽轮枝菌PEG介导的原生质体遗传转化系统 | 第37-38页 |
| ·VdHog1突变体的验证 | 第38-39页 |
| ·VdHog1突变体的表型观察 | 第39-47页 |
| ·VdHog1突变体在PDA平板上的表型观察 | 第39-40页 |
| ·VdHog1突变体在渗透胁迫条件下的表型 | 第40-41页 |
| ·VdHog1基因对过氧化氢及CM-C、CM-N的条件下生长情况 | 第41-42页 |
| ·VdHog1基因在刚果红和CuSO4的胁迫条件下的生长情况 | 第42-43页 |
| ·VdHog1基因在农药多菌灵和甲基硫菌灵的胁迫条件下的生长情况 | 第43-44页 |
| ·Hog1突变体对农药咯菌腈的胁迫表型分析 | 第44-45页 |
| ·Hog1基因的缺失对微菌核形成的影响 | 第45-47页 |
| ·VdHog1基因调控与黑色素形成相关的基因Melanin家族基因 | 第47-48页 |
| ·大丽轮枝菌dsRNA干扰的基因沉默系统的建立 | 第48-51页 |
| ·GFP基因的沉默载体的构建 | 第48页 |
| ·GFP沉默转化子的荧光观察 | 第48-49页 |
| ·GFP沉默突变体中的GFP基因相对表达量分析 | 第49-50页 |
| ·GFP沉默突变体中GFP基因的拷贝数分析 | 第50-51页 |
| ·Melanin家族基因的沉默 | 第51-54页 |
| ·Melanin家族基因沉默载体的构建及转化 | 第51页 |
| ·Melanin家族基因沉默突变体的表型及qPCR的相对表达量 | 第51-52页 |
| ·黑色素抑制剂对Melanin家族基因微菌核形成的影响 | 第52-54页 |
| 4. 结论 | 第54-55页 |
| 5. 讨论 | 第55-61页 |
| ·VdHog1基因参与的渗透胁迫MAPK信号传导途径的作用 | 第55-56页 |
| ·VdHog1基因参与调控的功能以及下游调控的基因 | 第56-58页 |
| ·黑色素合成途径与微菌核形成的关系 | 第58-59页 |
| ·VdHog1基因参与调控微菌核形成的机制 | 第59-61页 |
| 附录1 引物 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 个人简介 | 第71-73页 |
| 导师简介 | 第73-74页 |
| 副导师简介 | 第74-75页 |
| 获得成果目录 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
