人白介素-2和人血清白蛋白融合蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的表达
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·人白介素-2 概况 | 第7-8页 |
| ·人白介素-2 | 第7页 |
| ·IL-2 的结构 | 第7页 |
| ·IL-2 的生物学活性 | 第7-8页 |
| ·IL-2 研究进展 | 第8页 |
| ·长效重组药物的研究 | 第8-11页 |
| ·基因突变 | 第8-9页 |
| ·化学修饰 | 第9页 |
| ·基因融合 | 第9-11页 |
| ·中国仓鼠卵巢细胞表达系统 | 第11-12页 |
| ·表达系统概述 | 第11-12页 |
| ·CHO细胞表达系统的优点 | 第12页 |
| ·建立高效稳定的CHO表达系统的策略 | 第12-13页 |
| ·高效表达载体的构建 | 第12-13页 |
| ·宿主细胞改造 | 第13页 |
| ·筛选策略 | 第13页 |
| ·立题意义和主要研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第15-29页 |
| ·实验材料 | 第15-19页 |
| ·菌株、细胞株、质粒及引物 | 第15页 |
| ·实验所用试剂 | 第15-16页 |
| ·仪器设备 | 第16-17页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第17-19页 |
| ·实验方法 | 第19-29页 |
| ·融合蛋白重组质粒的构建 | 第19-22页 |
| ·质粒的大量提取 | 第22页 |
| ·CHO细胞培养与保藏 | 第22-23页 |
| ·CHO细胞转染 | 第23页 |
| ·稳定高表达细胞株筛选 | 第23-24页 |
| ·细胞悬浮驯化 | 第24-25页 |
| ·摇瓶终筛 | 第25页 |
| ·细胞株稳定性检测 | 第25页 |
| ·摇瓶流加培养实验 | 第25页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| ·蛋白检测方法 | 第26-28页 |
| ·融合蛋白生物活性测定 | 第28页 |
| ·糖含量测定 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-44页 |
| ·融合蛋白表达质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·表达融合蛋白的CHO细胞株的构建及筛选 | 第30-37页 |
| ·表达融合蛋白的CHO细胞株的构建 | 第30-31页 |
| ·表达融合蛋白的CHO细胞株的筛选 | 第31-34页 |
| ·摇瓶终筛 | 第34-36页 |
| ·细胞株稳定性鉴定 | 第36页 |
| ·细胞表达液的生物活性鉴定 | 第36-37页 |
| ·摇瓶流加培养 | 第37-39页 |
| ·融合蛋白的纯化及活性测定 | 第39-44页 |
| ·Blue Sepharose亲和层析 | 第39-40页 |
| ·Phenyl Sepharose疏水层析 | 第40-41页 |
| ·Q Sepharose阴离子交换层析 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白纯化工艺总结 | 第42-43页 |
| ·纯化蛋白生物活性测定 | 第43-44页 |
| 第四章 主要结论与展望 | 第44-45页 |
| ·主要结论 | 第44页 |
| ·存在的问题与展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
