| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 专业词汇中英文对照表 | 第11-17页 |
| 1 绪论 | 第17-48页 |
| ·RNA修饰 | 第17-20页 |
| ·RNA甲基化修饰及其甲基化酶的种类 | 第17-18页 |
| ·mRNA甲基化修饰m~7G和m~5C | 第18-19页 |
| ·tRNA甲基化修饰 | 第19页 |
| ·rRNA甲基化修饰 | 第19-20页 |
| ·snRNA/snoRNA甲基化修饰 | 第20页 |
| ·mRNA上m~6A甲基化修饰 | 第20-28页 |
| ·m~6A的特点及分布 | 第20-21页 |
| ·M~6A甲基化酶简介 | 第21-24页 |
| ·M~6A去甲基化酶 | 第24-25页 |
| ·M~6A阅读蛋白(m~6A Read Protein)及m~6A功能简介 | 第25-28页 |
| ·ALKBH加双氧酶蛋白家族 | 第28-31页 |
| ·非血红素Fe~(2+)和α-酮戊二酸依赖的加双氧酶超家族 | 第28页 |
| ·大肠杆菌ALKB加双氧酶 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌ALKB哺乳动物同源蛋白ALKBH1-8 | 第29-31页 |
| ·FTO简介 | 第31-37页 |
| ·FTO与肥胖症的关联 | 第31-34页 |
| ·FTO对其他疾病及生物学通路的影响 | 第34-35页 |
| ·FTO的生化底物——RNA上的m~6A | 第35-37页 |
| ·mRNA可变剪接调控 | 第37-47页 |
| ·mRNA剪接概述 | 第37-38页 |
| ·可变剪接 | 第38-40页 |
| ·mRNA剪接复合体的组装 | 第40-42页 |
| ·pre-mRNA剪接调节 | 第42-47页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-72页 |
| ·实验材料 | 第48-54页 |
| ·常用试剂及试剂盒 | 第48-50页 |
| ·常用实验仪器及设备 | 第50-51页 |
| ·实验用抗体信息 | 第51页 |
| ·实验用质粒信息 | 第51页 |
| ·实验用siRNA序列信息 | 第51-52页 |
| ·实验用主要引物序列信息 | 第52-54页 |
| ·实验方法 | 第54-72页 |
| ·重组质粒的构建 | 第54页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第54页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第54-57页 |
| ·蛋白质免疫印迹(western blot) | 第57-58页 |
| ·RNA提取 | 第58-59页 |
| ·RNA斑点印迹(Dot blot) | 第59页 |
| ·半定量逆转录PCR和real-time PCR | 第59-61页 |
| ·贴壁细胞培养及冻存 | 第61-62页 |
| ·细胞转染 | 第62-63页 |
| ·红油O染色实验 | 第63页 |
| ·脂肪细胞甘油三酯定量检测 | 第63-64页 |
| ·PAR-clip实验 | 第64-66页 |
| ·m~6A-IP | 第66页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第66-67页 |
| ·测序数据比对 | 第67-68页 |
| ·转录组数据分析 | 第68页 |
| ·m~6A peak识别和注释 | 第68-69页 |
| ·m~6A修饰保守序列分析 | 第69页 |
| ·m~6A修饰水平和基因表达的关联分析 | 第69页 |
| ·可变剪接分析 | 第69-70页 |
| ·m~6A修饰区域落在剪切点附近分析 | 第70页 |
| ·m~6A修饰区域和SR蛋白的RNA结合位点的空间距离分析 | 第70-71页 |
| ·m~6A-SRSF1和SRSF2关联的外显子跳跃分析 | 第71页 |
| ·层次聚类分析 | 第71页 |
| ·GO分析 | 第71页 |
| ·统计学分析 | 第71-72页 |
| 3 研究结果 | 第72-106页 |
| ·FTO表达降低对3T3-L1脂肪前体细胞分化影响研究 | 第72-77页 |
| ·确定3T3-L1脂肪前体细胞体外分化条件 | 第72-73页 |
| ·FTO表达降低抑制脂肪细胞分化 | 第73-74页 |
| ·3T3-L1脂肪前体细胞分化中FTO和METTL3的表达变化 | 第74-76页 |
| ·FTO野生型和突变体对3T3-L1脂肪前体细胞分化的影响 | 第76-77页 |
| ·M~6A修饰在脂肪细胞分化中的生物信息分析 | 第77-84页 |
| ·3T3-L1细胞m~6A修饰在mRNA的分布比例及保守序列 | 第77-78页 |
| ·FTO和METTL3共同调节部分基因mRNA的m~6A修饰 | 第78-80页 |
| ·FTO和METTL3共同调节基因的m~6A含量分析 | 第80-81页 |
| ·FTO和METTL3共同调节428个差异基因的功能聚类分析 | 第81-82页 |
| ·3T3-L1脂肪前体细胞分化各时期m~6A peak维恩图及保守序列 | 第82-83页 |
| ·脂肪前体细胞分化各时期差异基因的表达和m~6A含量聚类分析 | 第83-84页 |
| ·FTO介导m~6A修饰对RNA剪接过程的生物信息分析 | 第84-87页 |
| ·FTO介导m~6A修饰在外显子上分布情况研究 | 第84-85页 |
| ·FTO和METTL3共调节基因的isoform | 第85-86页 |
| ·FTO和METTL3共同调节isoform的m~6A修饰分析 | 第86-87页 |
| ·FTO和METTL3共同调节差异isoform的基因功能聚类分析 | 第87页 |
| ·M~6A修饰序列与5’、3’剪接位点旁侧序列关系的分析研究 | 第87-93页 |
| ·M~6A修饰在3T3-L1细胞5’、3’剪接位点旁侧外显子内高富集 | 第87-89页 |
| ·M~6A修饰在分化过程各时期5’、3’剪接位点旁侧外显子内高富集 | 第89-90页 |
| ·M~6A修饰和SRSF1、SRSF2 ESE结合区域存在空间重合 | 第90-92页 |
| ·SRSF1和SRSF2结合序列在mRNA 5’、3’剪接位点外显子内高富集 | 第92-93页 |
| ·M~6A修饰对SRSF2结合靶基因剪接过程影响研究 | 第93-100页 |
| ·FTO介导m6A修饰影响SRSF2结合RNA的能力但并不影响SRSF4 | 第93-96页 |
| ·M~6A含量升高可增加SRSF2结合外显子保留水平 | 第96-98页 |
| ·M~6A含量下降可降低SRSF2结合外显子保留水平 | 第98-99页 |
| ·FBX09和KIF13A可变剪接状态依赖于SRSF2蛋白 | 第99-100页 |
| ·M~6A修饰调控脂肪转录相关因子RUNX1T1可变剪接并影响脂肪细胞分化 | 第100-105页 |
| ·M6A修饰调控脂肪转录相关因子RUNX1T1可变剪接 | 第100-102页 |
| ·RUNX1T1短片段在脂肪细胞分化中表达逐渐降低 | 第102-103页 |
| ·RUNX1T1短片段可促进脂肪细胞分化 | 第103-105页 |
| ·剪接位点附近外显子内m~6A修饰参与SRSF2功能调节模型示意图 | 第105-106页 |
| 4 分析讨论 | 第106-109页 |
| 参考文献 | 第109-124页 |
| 作者简介及在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第124-125页 |
