| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-16页 |
| ·海参简介 | 第10页 |
| ·海参自溶与蛋白酶 | 第10页 |
| ·基质金属蛋白酶简介 | 第10-13页 |
| ·细胞外基质(ECM) | 第11页 |
| ·MMPs的结构 | 第11页 |
| ·MMPs的分类和特点 | 第11-12页 |
| ·MMPs的研究进展 | 第12-13页 |
| ·内源性基质金属蛋白酶抑制剂简介 | 第13-14页 |
| ·内源性蛋白酶抑制剂 | 第13页 |
| ·TIMPs的分类及功能 | 第13-14页 |
| ·TIMPs的研究进展 | 第14页 |
| ·MMP及TIMP相互作用 | 第14-15页 |
| ·立题背景和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 海参MMP和TIMP全长序列的克隆及生物信息学分析 | 第16-45页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·实验材料与方法 | 第16-28页 |
| ·实验原料 | 第16页 |
| ·实验设备 | 第16-17页 |
| ·实验试剂 | 第17-21页 |
| ·海参Total RNA的提取与纯化 | 第18-19页 |
| ·引物的设计与合成 | 第19-20页 |
| ·cDNA的合成 | 第20-21页 |
| ·目的基因cDNA全长序列的获取 | 第21-24页 |
| ·特异性片段的获取 | 第21-22页 |
| ·3'RACE扩增 | 第22-24页 |
| ·目的基因ORF验证及测序 | 第24-28页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的克隆及验证 | 第26-27页 |
| ·质粒提取及测序 | 第27-28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-44页 |
| ·总RNA提取检验 | 第28页 |
| ·海参MMP序列及生物信息学分析 | 第28-37页 |
| ·海参MMP序列的获取 | 第28-30页 |
| ·cDNA全长序列的生物信息学分析结果 | 第30-37页 |
| ·海参TIMP序列及生物信息学分析结果 | 第37-44页 |
| ·海参TIMP序列的获取 | 第37-38页 |
| ·cDNA全长序列的生物信息学分析结果 | 第38-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第三章 海参自溶过程中MMP-1及TIMP-1的基因表达 | 第45-63页 |
| ·前言 | 第45页 |
| ·实验材料与方法 | 第45-50页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·实验原料及处理 | 第45页 |
| ·实验设备 | 第45-46页 |
| ·实验试剂 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·海参Total RNA的提取与纯化 | 第47页 |
| ·RNA纯化及反转 | 第47-48页 |
| ·引物的设计与合成 | 第48-49页 |
| ·荧光Real-Time PCR | 第49页 |
| ·建立标准曲线 | 第49页 |
| ·样品检测及数据处理 | 第49-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-62页 |
| ·RNA提取结果 | 第50-51页 |
| ·Real-Time PCR检测方法的建立 | 第51-55页 |
| ·Cyt-b基因标准曲线的建立 | 第51-52页 |
| ·MMP-1基因标准曲线的建立 | 第52-54页 |
| ·TIMP-1基因标准曲线的建立 | 第54-55页 |
| ·Real-Time PCR定量结果 | 第55-62页 |
| ·MMP-1和TIMP-1的组织分布 | 第55-57页 |
| ·时序表达结果 | 第57-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第四章 海参TIMP-1的蛋白重组表达 | 第63-75页 |
| ·前言 | 第63页 |
| ·实验材料与方法 | 第63-69页 |
| ·实验材料 | 第63-65页 |
| ·实验设备 | 第63-64页 |
| ·实验试剂 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-69页 |
| ·引物的设计与合成 | 第65页 |
| ·PCR扩增及产物纯化 | 第65-66页 |
| ·表达质粒的构建及测序 | 第66-67页 |
| ·诱导表达及鉴定 | 第67-69页 |
| ·诱导表达条件的优化及鉴定 | 第69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-74页 |
| ·质粒构建及测序 | 第69-70页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第70-72页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件优化 | 第72-74页 |
| ·小结 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84页 |