| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-20页 |
| 1 弓形虫病概况 | 第11-14页 |
| ·弓形虫病原学 | 第11页 |
| ·弓形虫生活史 | 第11-12页 |
| ·流行病学 | 第12页 |
| ·弓形虫病诊断 | 第12-14页 |
| ·弓形虫病防治 | 第14页 |
| 2 佐剂在弓形虫疫苗上的应用 | 第14-16页 |
| 3 细胞渗透肽的种类 | 第16-17页 |
| ·反式转录激活催化剂(transactivator of transcription,TAT) | 第16-17页 |
| ·果蝇同源异型转录因子(Homeodomain of Antennapedia,ANTP) | 第17页 |
| ·VP22转录因子 | 第17页 |
| ·其他类型渗透肽 | 第17页 |
| 4 细胞渗透肽在动物疫苗方面的应用 | 第17-19页 |
| 5 本实验的研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-39页 |
| 1 材料 | 第20-27页 |
| ·细胞与虫株及其培养所用材料 | 第20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·载体及试剂 | 第20页 |
| ·试验溶液配方 | 第20-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-27页 |
| 2 方法 | 第27-39页 |
| ·弓形虫PLK/GFP株的体外培养 | 第27页 |
| ·引物设计与合成 | 第27页 |
| ·TAT双链的合成 | 第27-28页 |
| ·pET28a-TAT重组质粒的构建及鉴定 | 第28-30页 |
| ·pET28a-TAT-EGFP、pET28a-TAT-SAG1、pET28a-TAT-GRA #4pET28a-TAT-A-VMA1重组质粒的构建 | 第30-32页 |
| ·pET28a-SAG1、pET28a-GRA4、pET28a-AMA1重组质粒的构建 | 第32-34页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第34页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌的诱导表达及表达形式的优化 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·弓形虫特异性基因表达产物的Western blotting分析 | 第36-37页 |
| ·标准BSA对比检测融合蛋白浓度 | 第37页 |
| ·TAT-EGFP融合蛋白的穿膜活性分析 | 第37页 |
| ·动物免疫及免疫保护性检测 | 第37-38页 |
| ·间接ELISA检测体液免疫水平 | 第38-39页 |
| 结果 | 第39-51页 |
| 1 弓形虫PLK/GFP株的体外培养 | 第39页 |
| 2 目的基因的扩增 | 第39-40页 |
| 3 重组质粒pET28a-TAT的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 4 重组质粒pET28a-TAT-EGFP的PCR及酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 5 弓形虫特异性抗原基因重组质粒的PCR及酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 6 重组质粒的序列测定 | 第43页 |
| 7 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达及表达形式的优化 | 第43-44页 |
| 8 融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| 9 TAT-SAG1、TAT-GRA4、TAT-AMA1、SAG1、GRA4、AMA1蛋白的复性 | 第45页 |
| 10 弓形虫特异性基因表达产物的Western blotting分析 | 第45-46页 |
| 11 标准BSA比对检测融合蛋白浓度 | 第46-47页 |
| 12 TAT-EGFP融合蛋白的穿膜活性分析 | 第47-48页 |
| 13 间接ELISA检测体液免疫水平 | 第48-50页 |
| 14 免疫保护性试验结果 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62-63页 |
| 在研期间发表的论文 | 第63页 |
