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新型抗原传递载体在抗弓形虫病疫苗上的初步应用

摘要第1-7页
Abstract第7-11页
前言第11-20页
 1 弓形虫病概况第11-14页
   ·弓形虫病原学第11页
   ·弓形虫生活史第11-12页
   ·流行病学第12页
   ·弓形虫病诊断第12-14页
   ·弓形虫病防治第14页
 2 佐剂在弓形虫疫苗上的应用第14-16页
 3 细胞渗透肽的种类第16-17页
   ·反式转录激活催化剂(transactivator of transcription,TAT)第16-17页
   ·果蝇同源异型转录因子(Homeodomain of Antennapedia,ANTP)第17页
   ·VP22转录因子第17页
   ·其他类型渗透肽第17页
 4 细胞渗透肽在动物疫苗方面的应用第17-19页
 5 本实验的研究目的及意义第19-20页
材料与方法第20-39页
 1 材料第20-27页
   ·细胞与虫株及其培养所用材料第20页
   ·实验动物第20页
   ·载体及试剂第20页
   ·试验溶液配方第20-25页
   ·主要仪器设备第25-27页
 2 方法第27-39页
   ·弓形虫PLK/GFP株的体外培养第27页
   ·引物设计与合成第27页
   ·TAT双链的合成第27-28页
   ·pET28a-TAT重组质粒的构建及鉴定第28-30页
   ·pET28a-TAT-EGFP、pET28a-TAT-SAG1、pET28a-TAT-GRA #4pET28a-TAT-A-VMA1重组质粒的构建第30-32页
   ·pET28a-SAG1、pET28a-GRA4、pET28a-AMA1重组质粒的构建第32-34页
   ·重组质粒的序列测定第34页
   ·重组质粒在大肠杆菌的诱导表达及表达形式的优化第34页
   ·SDS-PAGE电泳第34-35页
   ·重组蛋白的纯化第35-36页
   ·弓形虫特异性基因表达产物的Western blotting分析第36-37页
   ·标准BSA对比检测融合蛋白浓度第37页
   ·TAT-EGFP融合蛋白的穿膜活性分析第37页
   ·动物免疫及免疫保护性检测第37-38页
   ·间接ELISA检测体液免疫水平第38-39页
结果第39-51页
 1 弓形虫PLK/GFP株的体外培养第39页
 2 目的基因的扩增第39-40页
 3 重组质粒pET28a-TAT的PCR鉴定第40-41页
 4 重组质粒pET28a-TAT-EGFP的PCR及酶切鉴定第41-42页
 5 弓形虫特异性抗原基因重组质粒的PCR及酶切鉴定第42-43页
 6 重组质粒的序列测定第43页
 7 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达及表达形式的优化第43-44页
 8 融合蛋白的纯化第44-45页
 9 TAT-SAG1、TAT-GRA4、TAT-AMA1、SAG1、GRA4、AMA1蛋白的复性第45页
 10 弓形虫特异性基因表达产物的Western blotting分析第45-46页
 11 标准BSA比对检测融合蛋白浓度第46-47页
 12 TAT-EGFP融合蛋白的穿膜活性分析第47-48页
 13 间接ELISA检测体液免疫水平第48-50页
 14 免疫保护性试验结果第50-51页
讨论第51-54页
结论第54-55页
参考文献第55-61页
致谢第61-62页
作者简介第62-63页
在研期间发表的论文第63页

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