重组酯酶APE1547的位点特异性固定化
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-19页 |
| ·固定化酶研究进展 | 第9-10页 |
| ·固定化酶简介 | 第9页 |
| ·固定化酶的研究现状 | 第9-10页 |
| ·位点特异性共价固定化酶研究进展 | 第10-11页 |
| ·位点特异性固定化酶分类 | 第10页 |
| ·位点特异性共价固定化酶研究进展 | 第10-11页 |
| ·嗜热酶简介 | 第11-12页 |
| ·酯水解酶的研究进展 | 第12-17页 |
| ·酯水解酶简介 | 第12-13页 |
| ·羧基脂类酯水解酶的分类与来源 | 第13页 |
| ·各种酯水解酶的结构与催化机制 | 第13-16页 |
| ·极端嗜热酯酶的研究现状 | 第16-17页 |
| ·本课题的选题思路 | 第17-19页 |
| 第2章 重组酯酶基因的克隆表达 | 第19-35页 |
| ·简介 | 第19-20页 |
| ·材料和方法 | 第20-30页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·菌种和质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·培养基配制 | 第21-22页 |
| ·试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·常用储备液 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·重组基因的载体构建 | 第24-27页 |
| ·重组单克隆菌的筛选与鉴定 | 第27-28页 |
| ·表达工程菌的转化和筛选 | 第28页 |
| ·4c1547改造蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| ·蛋白浓度测定和酶的比活计算 | 第29-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-33页 |
| ·pET15b-1547的提取 | 第30页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的构建 | 第31页 |
| ·重组质粒的测序和转化 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第32页 |
| ·重组蛋白的浓度和酶活 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-35页 |
| 第3章 位点特异性固定化极端嗜热酯酶 | 第35-45页 |
| ·简介 | 第35-36页 |
| ·材料和方法 | 第36-38页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·相关实验方面溶液的配制 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·预处理大孔树脂 | 第37页 |
| ·位点特异性离子交换固定化 | 第37-38页 |
| ·位点特异性共价固定化 | 第38页 |
| ·蛋白浓度及酶活力的测定 | 第38页 |
| ·固定化脂肪酶的活力回收率 | 第38页 |
| ·实验结果与讨论 | 第38-44页 |
| ·位点特异性离子交换固定化 | 第38-41页 |
| ·位点特异性共价固定化 | 第41-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
