| 致谢 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 1. 文献综述 | 第10-23页 |
| ·SO_2对植物的影响、研究现状及存在问题 | 第10-14页 |
| ·SO_2的性质 | 第10页 |
| ·SO_2对植物生理生化的影响 | 第10-12页 |
| ·伤害症状 | 第10-11页 |
| ·伤害机理 | 第11页 |
| ·生理生化的影响 | 第11-12页 |
| ·SO_2对植物生长发育的影响 | 第12页 |
| ·研究成果的应用 | 第12页 |
| ·SO_2对植物影响的研究现状及存在问题 | 第12-14页 |
| ·监测大气SO_2污染的指标筛选研究 | 第12页 |
| ·实验方法的改进 | 第12页 |
| ·SO_2与其他污染物的复合污染对植物影响的研究 | 第12-13页 |
| ·SO_2污染对森林间接影响的研究 | 第13页 |
| ·分子水平上的研究 | 第13-14页 |
| ·光系统Ⅱ32KD蛋白基因psbA | 第14-15页 |
| ·psbA基因的结构特点 | 第14页 |
| ·psbA基因的序列保守性 | 第14-15页 |
| ·psbA基因的功能研究 | 第15页 |
| ·mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) | 第15页 |
| ·植物转基因方法概述 | 第15-21页 |
| ·直接转化法 | 第16-18页 |
| ·基因枪法 | 第16页 |
| ·显微注射法 | 第16-17页 |
| ·超声波介导法 | 第17页 |
| ·PEG介导法 | 第17页 |
| ·脂质体介导法 | 第17-18页 |
| ·电激法 | 第18页 |
| ·脉冲电泳法 | 第18页 |
| ·间接转化法 | 第18-20页 |
| ·农杆菌介导法 | 第19-20页 |
| ·病毒介导法 | 第20页 |
| ·染色体介导法 | 第20页 |
| ·生殖细胞转化法 | 第20-21页 |
| ·花粉管通道法 | 第20页 |
| ·种胚浸泡法 | 第20-21页 |
| ·转基因技术在植物基因功能研究中的应用前景 | 第21页 |
| ·RNA沉默技术 | 第21-23页 |
| ·RNA沉默的发现 | 第21页 |
| ·RNA沉默的机制 | 第21-22页 |
| ·小发夹RNA沉默 | 第22页 |
| ·RNA沉默的应用 | 第22-23页 |
| 2 引言 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·试剂和酶 | 第24页 |
| ·常用培养基和溶液试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·培养基配制 | 第24页 |
| ·试剂溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·DDRT-PCR改进后的引物 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-37页 |
| ·植物材料培养和处理 | 第25-26页 |
| ·植物材料培养 | 第25-26页 |
| ·材料处理与取样 | 第26页 |
| ·玉米中对SO_2胁迫响应相关基因片段的筛选 | 第26-29页 |
| ·RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·RNA提取后的纯化(以总RNA为50μl为例) | 第27页 |
| ·RNA纯化后电泳检测和浓度测定 | 第27页 |
| ·RNA的反转 | 第27-28页 |
| ·半定量PCR | 第28页 |
| ·DDRT-PCR | 第28-29页 |
| ·电泳检测 | 第29页 |
| ·割胶回收差异基因片段 | 第29页 |
| ·差异基因片段的测序与比对分析 | 第29-31页 |
| ·差异基因片段连接T载体并转化大肠杆菌 | 第29-30页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH10B | 第30页 |
| ·菌落PCR检测、测序及序列分析 | 第30-31页 |
| ·差异基因片段Zp在玉米中表达分析 | 第31页 |
| ·差异基因片段Zp在玉米植株各部位的表达分析 | 第31页 |
| ·差异基因片段Zp在SO_2和Na_2SO_3胁迫下的表达分析 | 第31页 |
| ·候选基因ZmpsbA全长的同源克隆 | 第31-32页 |
| ·ZmpsbA过量表达和RNA沉默载体的构建 | 第32-34页 |
| ·ZmpsbA真核过量表达载体P27-Gfp-psbA的构建 | 第32-34页 |
| ·ZmpsbA真核RNA沉默载体P27-psbA(Ri)的构建 | 第34页 |
| ·农杆菌介导法转化构建好的基因表达载体于珊西烟中 | 第34-35页 |
| ·提取浸染烟草DNA及PCR检测 | 第35-36页 |
| ·浸染烟草DNA的提取 | 第35页 |
| ·烟草提取DNA的纯化 | 第35-36页 |
| ·转基因烟草T1代培育、初步处理及分析 | 第36-37页 |
| 4. 结果与分析 | 第37-59页 |
| ·玉米中对SO_2胁迫响应相关基因片段的筛选 | 第37-39页 |
| ·总RNA提取与检测 | 第37页 |
| ·SO_2胁迫处理后玉米相关基因的表达差异分析 | 第37-38页 |
| ·差异表达基因片段的序列分析 | 第38-39页 |
| ·差异表达基因片段Zp在玉米中表达分析验证 | 第39-42页 |
| ·Zp在玉米植株不同部位的表达分析 | 第39-40页 |
| ·Zp在SO_2胁迫下的表达分析 | 第40-42页 |
| ·Zp在NaHSO_3胁迫下的表达分析 | 第42页 |
| ·ZmpsbA基因的同源克隆及序列分析 | 第42-43页 |
| ·ZmpsbA基因的同源克隆 | 第42页 |
| ·ZmpsbA基因全长cDNA序列的生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·ZmpsbA载体的构建、转化与转基因植株的检测 | 第43-51页 |
| ·ZmpsbA过量表达载体的构建、转化与转基因植株的检测 | 第43-47页 |
| ·ZmpsbA过量表达载体P27-Gfp-psbA的构建 | 第43-45页 |
| ·叶盘转化法获得ZmpsbA转基因珊西烟植株并检测 | 第45-47页 |
| ·ZmpsbA RNA沉默载体的构建、转化与转基因植株的检测 | 第47-51页 |
| ·ZmpsbA RNA沉默载体P27-psbA(Ri)的构建 | 第47-49页 |
| ·叶盘转化法获得ZmpsbA RNA沉默转基因珊西烟植株及检测 | 第49-51页 |
| ·ZmpsbA RNA沉默珊西烟植株的温度敏感性和果实不育性 | 第51页 |
| ·转基因烟草的初步处理与分析 | 第51-59页 |
| ·ZmpsbA在转基因烟草中的表达分析 | 第51-53页 |
| ·转基因烟草中其他对胁迫敏感基因的表达分析 | 第53-59页 |
| 5. 结论与讨论 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| ·mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) | 第59-60页 |
| ·psbA基因的功能 | 第60页 |
| ·展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 英文摘要 | 第66-67页 |
