| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-26页 |
| 1 SO_2的研究进展 | 第9-13页 |
| ·SO_2的性质 | 第9页 |
| ·SO_2对植物的影响 | 第9-11页 |
| ·SO研究状况 | 第11-12页 |
| ·有关SO_2污染在分子水平上的研究概况 | 第12-13页 |
| 2 植物硫营养吸收运转和同化代谢 | 第13-14页 |
| ·硫酸盐的吸收运转和同化代谢 | 第13页 |
| ·硫酸盐的吸收和转运 | 第13页 |
| ·硫酸盐的活化 | 第13-14页 |
| ·硫酸盐的还原 | 第14页 |
| ·半胱氨酸(Cys)的合成 | 第14页 |
| 3 亚硫酸盐还原酶研究进展 | 第14-20页 |
| ·简介 | 第14-15页 |
| ·酶的分离纯化及性质 | 第15-16页 |
| ·分子结构与功能 | 第16-18页 |
| ·分子生物学研究 | 第18-19页 |
| ·应用 | 第19-20页 |
| 4 其他相关酶类的研究概况 | 第20-21页 |
| ·ATP硫酸化酶(ATPS) | 第20页 |
| ·APR(APS还原酶) | 第20-21页 |
| 5 植物的转基因 | 第21-25页 |
| ·生物学方法 | 第21-23页 |
| ·物理法 | 第23-24页 |
| ·拟南芥的花序浸染法 | 第24-25页 |
| 6 引言 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 玉米亚硫酸还原酶(ZMSR)的克隆和序列分析 | 第26-37页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| ·常规菌种 | 第26页 |
| ·植物材料培养 | 第26页 |
| ·各种酶及试剂 | 第26页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-31页 |
| ·RNA的提取 | 第27页 |
| ·RNA提取后的纯化(以总RNA为50μl为例) | 第27-28页 |
| ·RNA纯化后电泳检测和浓度测定 | 第28页 |
| ·反转录合成第一条链cDNA | 第28页 |
| ·巢式RT-PCR | 第28-29页 |
| ·电泳检测 | 第29页 |
| ·割胶回收目的基因片段 | 第29-30页 |
| ·目的基因片段的测序及序列分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-35页 |
| ·目的基因克隆 | 第31-33页 |
| ·序列分析 | 第33-35页 |
| 4 小结与讨论 | 第35-37页 |
| ·小结 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 ZMSR在不同胁迫下的表达模式分析 | 第37-43页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·试剂和酶 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| ·材料的处理 | 第37-38页 |
| ·RNA的提取及纯化 | 第38页 |
| ·RNA纯化 | 第38-39页 |
| 3 实时荧光定量PCR(REAL-TIME PCR)分析基因的表达 | 第39-40页 |
| ·SYBR Ⅰ的作用原理 | 第39页 |
| ·荧光real-time PCR所用引物 | 第39页 |
| ·荧光real-time PCR体系 | 第39-40页 |
| ·荧光real-time PCR程序 | 第40页 |
| ·数据分析 | 第40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-42页 |
| ·ZmSR在不同胁迫下的表达谱 | 第40-41页 |
| ·ZmSR在玉米不同部位的表达 | 第41-42页 |
| 5 小结与讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 原核表达载体构建及蛋白诱导表达 | 第43-57页 |
| 1 材料 | 第43-46页 |
| ·常规菌种 | 第43页 |
| ·载体 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第43-46页 |
| 2 方法 | 第46-53页 |
| ·制备目的基因 | 第46-47页 |
| ·回收和纯化目的基因 | 第47-48页 |
| ·限制性内切酶酶切目的基因及回收 | 第48页 |
| ·制备载体pET30a | 第48-49页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第52-53页 |
| 3. 结果与分析 | 第53-56页 |
| ·pET30-SR原核表达载体构建 | 第53-55页 |
| ·SR蛋白的诱导 | 第55-56页 |
| 4 小结与讨论 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 植物表达载体的构建 | 第57-66页 |
| 1 材料 | 第57页 |
| ·载体 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-61页 |
| ·P27植物表达载体的构建 | 第57-60页 |
| ·EG植物表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-65页 |
| ·P27-SR表达载体的构建 | 第61-64页 |
| ·EG表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 4. 小结与讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 ZMSR转基因拟南芥株系的获得及SO_2胁迫鉴定 | 第66-73页 |
| 1 材料 | 第66页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-69页 |
| ·拟南芥花序浸染法转化拟南芥 | 第66页 |
| ·转基因株系的获得及分子检测 | 第66-67页 |
| ·atsir T-DNA插入突变的鉴定 | 第67-69页 |
| 3. 结果分析 | 第69-72页 |
| ·atsr T-DNA插入突变纯合体的鉴定 | 第69-71页 |
| ·转基因株系的获得 | 第71-72页 |
| 4. 小结与讨论 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 英文摘要 | 第81页 |
