| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-28页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·APC基因的结构及其氨基酸序列组成 | 第13-15页 |
| ·基因结构以及同源蛋白 | 第13-14页 |
| ·氨基酸序列和相互作用蛋白 | 第14-15页 |
| ·APC基因的突变 | 第15-16页 |
| ·APC的功能 | 第16-22页 |
| ·APC与Wnt信号通路 | 第17-18页 |
| ·APC与细胞粘附和迁移 | 第18-21页 |
| ·APC和染色体的稳定性 | 第21-22页 |
| ·APC基因的其它功能 | 第22页 |
| ·APC与疾病 | 第22-26页 |
| ·APC与家族性腺瘤息肉病及结肠癌 | 第22-24页 |
| ·APC基因与神经系统疾病 | 第24-25页 |
| ·APC与其它疾病 | 第25页 |
| ·APC相关疾病的治疗方法研究进展 | 第25-26页 |
| ·课题研究意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料和方法 | 第28-38页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·质粒 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-38页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第29-30页 |
| ·基因克隆 | 第30页 |
| ·基因突变 | 第30-31页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第31-32页 |
| ·硒代蛋白的制备 | 第32-34页 |
| ·蛋白质复合物的制备 | 第34页 |
| ·蛋白结晶筛选及优化 | 第34-35页 |
| ·X射线晶体衍射数据收集和处理 | 第35-36页 |
| ·结构解析和修正 | 第36页 |
| ·蛋白质相互作用的检测 | 第36-38页 |
| 第三章 APC-ARM结构域的结构和功能研究 | 第38-66页 |
| ·研究背景 | 第38-40页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·质粒构建 | 第40页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第40页 |
| ·Trypsin限制性酶切 | 第40-41页 |
| ·晶体生长和数据收集 | 第41-42页 |
| ·硒代蛋白的表达和纯化 | 第42页 |
| ·结构解析和数据修正 | 第42页 |
| ·圆二色光谱测定 | 第42-43页 |
| ·Normal mode分析 | 第43页 |
| ·ARM结构域表面的Consurf分析 | 第43页 |
| ·结果和讨论 | 第43-64页 |
| ·APC-ARM研究片段的选择 | 第43-45页 |
| ·APC-ARM蛋白的纯化摸索 | 第45-48页 |
| ·APC-ARM结构域的结晶 | 第48-49页 |
| ·APC-ARM结构域的结构解析 | 第49-51页 |
| ·APC-ARM结构域的整体结构 | 第51-55页 |
| ·APC-ARM结构域表面的电荷分布 | 第55-56页 |
| ·APC-ARM结构域的底物结合位点分析 | 第56-58页 |
| ·APC-ARM结构的柔韧性 | 第58-59页 |
| ·APC-ARM结构域和其它ARM蛋白的比较 | 第59-61页 |
| ·APC-ARM与重复序列结构域性质的探讨 | 第61-64页 |
| ·串联重复序列蛋白的性质 | 第64页 |
| ·总结 | 第64-66页 |
| 第四章 APC-ARM结构域与Asef复合物的结构和功能研究 | 第66-104页 |
| ·前言 | 第66-71页 |
| ·Rho GTPases蛋白家族及其调控蛋白 | 第66-68页 |
| ·Rho蛋白家族和细胞骨架的调节 | 第68-69页 |
| ·APC与Asef | 第69-71页 |
| ·研究目标 | 第71页 |
| ·材料与方法 | 第71-78页 |
| ·质粒构建 | 第71页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第71-73页 |
| ·蛋白质结晶，数据收集和结构解析 | 第73-76页 |
| ·分子筛检测各突变体对结合的影响 | 第76-77页 |
| ·等温滴定热量检测实验（Isothermal titration calorimetry， ITC） | 第77页 |
| ·分子筛检测APC/Asef/Cdc42 三元复合物 | 第77页 |
| ·基于荧光光谱的Asef-GEF活性检测 | 第77-78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-103页 |
| ·APC/Asef的复合物的片段选择 | 第78-80页 |
| ·APC (407-751)/ Asef (170-194)复合物的整体结构 | 第80-83页 |
| ·APC (303-739)/ Asef (170-271)复合物的整体结构 | 第83-84页 |
| ·APC-ARM与APC-PreARM | 第84-86页 |
| ·Asef-ABR-SH3 与APC的结合方式 | 第86-88页 |
| ·APC的构象变化 | 第88-89页 |
| ·Asef的构象变化 | 第89-91页 |
| ·APC和Asef之间的亲和力检测及讨论 | 第91-93页 |
| ·APC与Asef的突变对结合的影响 | 第93-94页 |
| ·APC激活Asef的GEF活性检测 | 第94-96页 |
| ·APC激活Asef机制的探讨 | 第96-100页 |
| ·Asef活性调节机制的相关探讨 | 第100-102页 |
| ·基于APC/Asef复合物结构药物设计 | 第102-103页 |
| ·总结与展望 | 第103-104页 |
| 第五章 APC-ARM结构域与Amer1/WTX复合物的结构和功能研究 | 第104-130页 |
| ·前言 | 第104-108页 |
| ·Amer1 的蛋白结构与功能 | 第104-106页 |
| ·Amer1/WTX家族蛋白 | 第106-107页 |
| ·Amer1/WTX与疾病 | 第107页 |
| ·课题研究目标和意义 | 第107-108页 |
| ·材料和方法 | 第108-113页 |
| ·Amer1-A1，A2，A3 的基因克隆和表达纯化 | 第108页 |
| ·CA1, CA2, CA3 的定位 | 第108页 |
| ·APC与Amer1 的GST-pull down实验 | 第108-109页 |
| ·APC/CA1 和APC/CA2 复合物的制备 | 第109页 |
| ·APC/CA1 和APC/CA2 复合物的晶体生长和数据收集 | 第109-111页 |
| ·APC/CA1 和APC/CA2 复合物的结构解析 | 第111-112页 |
| ·APC和Amer1 的突变体结合检测 | 第112页 |
| ·等温滴定热量检测实验（Isothermal titration calorimetry， ITC） | 第112-113页 |
| ·结果和讨论 | 第113-129页 |
| ·Amer1 与APC的结合序列的定位 | 第113-116页 |
| ·APC/CA1 与APC/CA2 的复合物整体结构 | 第116-119页 |
| ·APC和Amer1 突变体对两者结合的影响 | 第119-121页 |
| ·APC/CA1，APC/CA2 以及APC/Asef结合方式比较 | 第121-123页 |
| ·第四个APC结合位点的发现 | 第123页 |
| ·Asef和Amer1 在细胞内与APC的结合方式探讨 | 第123-124页 |
| ·Amer1/APC复合物的功能探讨 | 第124-127页 |
| ·Amer蛋白家族的功能 | 第127-128页 |
| ·APC-ARM结构域识别其它配体蛋白的机制探讨 | 第128-129页 |
| ·总结与展望 | 第129-130页 |
| 第六章 APC与Dlg1 复合物的结构和功能研究 | 第130-156页 |
| ·前言 | 第130-133页 |
| ·Dlg1 的结构组成 | 第130-131页 |
| ·PDZ结构域和相互作用蛋白 | 第131-132页 |
| ·APC和Dlg1 的相互作用 | 第132-133页 |
| ·研究内容和意义 | 第133页 |
| ·材料与方法 | 第133-139页 |
| ·质粒构建 | 第133-134页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第134-135页 |
| ·PDZ1/APC-C11 与PDZ2/APC-C11 复合物的制备 | 第135页 |
| ·PDZ1/APC-C11 复合物的结晶及结构解析 | 第135-137页 |
| ·PDZ2/APC-C11 复合物的结晶及结构解析 | 第137-138页 |
| ·Dlg1(220-550）的限制性酶切 | 第138页 |
| ·GST pull-down检测 | 第138-139页 |
| ·等温滴定热量检测实验（Isothermal titration calorimetry， ITC） | 第139页 |
| ·实验结果和讨论 | 第139-155页 |
| ·Dlg1 PDZ1-3 结构域的分子内排列方式 | 第139-140页 |
| ·APC和Dlg1 各PDZ结构域体外结合实验 | 第140-142页 |
| ·PDZ1 和PDZ2 中的β2/β3 loop与APC的相互作用 | 第142-144页 |
| ·PDZ1/APC-C11 与PDZ2/APC-C11 的晶体结构 | 第144页 |
| ·APC与PDZ1 和PDZ2 的相互作用方式 | 第144-147页 |
| ·PDZ1 和PDZ2 与APC结合后的构象改变 | 第147-148页 |
| ·PDZ1 和PDZ2 之间的相互作用 | 第148-150页 |
| ·PDZ结构域与配体的特异性识别机制和调节 | 第150-151页 |
| ·MAGUKs蛋白家族含有多个PDZ结构域的意义 | 第151页 |
| ·Dlg1 作为一些原癌基因病毒靶标的作用机制 | 第151-152页 |
| ·APC和其它PDZ蛋白的相互作用 | 第152-153页 |
| ·APC/Dlg1 和细胞骨架的关系 | 第153-154页 |
| ·APC/Dlg1 复合的功能发挥机制 | 第154-155页 |
| ·总结与展望 | 第155-156页 |
| 结束语 | 第156-158页 |
| 参考文献 | 第158-178页 |
| 致谢 | 第178-179页 |
| 攻读博士期间论文发表及专利申请情况 | 第179-182页 |
| 附件 | 第182页 |
