| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 縮略词表 | 第13-14页 |
| 1 序言 | 第14-33页 |
| ·蓝细菌概述 | 第14-15页 |
| ·藻胆蛋白结构 | 第15-16页 |
| ·光敏色素的发现 | 第16-17页 |
| ·光敏色素蛋白的特征 | 第17-19页 |
| ·植物光敏色素蛋白的功能 | 第19-20页 |
| ·蓝细菌光敏色素蛋白的发现 | 第20-21页 |
| ·蓝细菌光敏色素的结构与特征 | 第21-24页 |
| ·蓝细菌光敏色素的合成 | 第24-28页 |
| ·藻胆色素的生物合成 | 第24-27页 |
| ·蓝细菌光敏色素的生物合成 | 第27页 |
| ·蓝细菌光敏色素生物合成的优化 | 第27-28页 |
| ·蓝细菌光敏色素蛋白的应用 | 第28-29页 |
| ·新型荧光蛋白探针的开发 | 第29-31页 |
| ·课题的研究目的与意义 | 第31-33页 |
| 2 蓝细菌光敏色素GAF结构域色素化生成橙色荧光蛋白的研究 | 第33-62页 |
| ·引言 | 第33-34页 |
| ·材料与仪器 | 第34-37页 |
| ·菌种与质粒 | 第34页 |
| ·培养基及试剂 | 第34-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-45页 |
| ·GAF结构域搜索比对 | 第37-38页 |
| ·表达质粒的构建 | 第38-41页 |
| ·重组色素蛋白菌株的构建 | 第41页 |
| ·色素蛋白的大量表达 | 第41-42页 |
| ·色素蛋白的纯化 | 第42页 |
| ·蛋白质的检测 | 第42-43页 |
| ·光谱分析 | 第43-44页 |
| ·色素蛋白的变性实验 | 第44页 |
| ·荧光量子产率和摩尔消光系数计算 | 第44页 |
| ·用荧光色素蛋白标记活体细胞的显微镜检测 | 第44-45页 |
| ·实验结果及分析 | 第45-60页 |
| ·CBCRs GAF结构域氨基酸序列 | 第45-49页 |
| ·重组色素蛋白的表达鉴定 | 第49-50页 |
| ·光化学性质分析 | 第50-55页 |
| ·荧光量子产率和摩尔消光系数计算结果 | 第55-60页 |
| ·荧光显微镜结果 | 第60页 |
| ·小结与讨论 | 第60-62页 |
| 3 GAF结构域基因与色素合成酶基因的融合 | 第62-71页 |
| ·引言 | 第62-63页 |
| ·材料与仪器 | 第63页 |
| ·菌种与质粒 | 第63页 |
| ·培养基及试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-66页 |
| ·融合蛋白的方案设计 | 第63-64页 |
| ·引物设计与合成 | 第64页 |
| ·表达质粒的构建 | 第64-65页 |
| ·融合蛋白菌株的表达 | 第65页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第65页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE与锌荧光实验 | 第65页 |
| ·融合蛋白的光谱分析 | 第65页 |
| ·融合蛋白的摩尔消光系数和荧光量子产率计算 | 第65-66页 |
| ·实验结果与分析 | 第66-70页 |
| ·融合蛋白序列 | 第66-67页 |
| ·融合基因质粒的鉴定 | 第67-68页 |
| ·融合蛋白的表达与鉴定 | 第68-69页 |
| ·融合蛋白的光谱测定 | 第69-70页 |
| ·融合蛋白摩尔消光系数和荧光量子产率计算结果 | 第70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 4 GAF结构域的寡聚化 | 第71-79页 |
| ·引言 | 第71页 |
| Abstract | 第71页 |
| ·菌种与质粒 | 第71页 |
| ·培养基及试剂 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-74页 |
| ·蛋白聚合方式设计 | 第71-72页 |
| ·引物设计 | 第72页 |
| ·寡聚色素蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第72-73页 |
| ·寡聚色素蛋白的光谱分析 | 第73页 |
| ·寡聚色素蛋白聚集态分析 | 第73页 |
| ·寡聚蛋白螺旋解聚-重聚体系的构建 | 第73-74页 |
| ·实验结果 | 第74-78页 |
| ·寡聚化基因序列 | 第74页 |
| ·寡聚蛋白质的SDS-PAGE | 第74-75页 |
| ·寡聚蛋白的吸收和荧光光谱结果 | 第75-76页 |
| ·寡聚蛋白分子筛凝胶层析结果 | 第76-77页 |
| ·寡聚蛋白的螺旋解聚与重聚 | 第77-78页 |
| ·本章小结 | 第78-79页 |
| 5 GAF结构域晶体结构研究 | 第79-99页 |
| ·引言 | 第79-82页 |
| ·研究背景介绍 | 第79页 |
| ·蛋白质结构生物学简介 | 第79-82页 |
| ·本研究主要内容与贡献 | 第82页 |
| ·实验材料 | 第82-85页 |
| ·菌种与质粒 | 第82-83页 |
| ·分子生物学相关生化试剂 | 第83页 |
| ·蛋白质表达、纯化和结晶所需试剂 | 第83-84页 |
| ·主要仪器 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-90页 |
| ·表达载体的构建 | 第85页 |
| ·PEB-All2699GAF1和PUB-All3691GAF2的表达与纯化 | 第85-86页 |
| ·纯化蛋白光谱分析 | 第86页 |
| ·蛋白浓度确定 | 第86-87页 |
| ·蛋白结晶方法条件的筛选与优化 | 第87-89页 |
| ·晶体数据收集 | 第89页 |
| ·蛋白质二级结构测定 | 第89页 |
| ·A112699 GAF1的定点突变 | 第89-90页 |
| ·结果与讨论 | 第90-98页 |
| ·蛋白结晶序列的确定 | 第90页 |
| ·蛋白纯化SDS-PAGE及光谱鉴定 | 第90-93页 |
| ·蛋白质晶体的生长 | 第93-94页 |
| ·晶体X衍射数据收集 | 第94-96页 |
| ·测定蛋白质二级结构CD光谱 | 第96页 |
| ·All2699GAF1单点突变凝胶过滤层析结果 | 第96-97页 |
| ·待解决的问题 | 第97-98页 |
| ·前景与展望 | 第98-99页 |
| 6 全文结论与讨论 | 第99-102页 |
| 参考文献 | 第102-115页 |
| 附录 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |