| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 缩略表 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-28页 |
| ·RNA修饰碱基m6A的研究进展 | 第9-16页 |
| ·RNA修饰碱基概况 | 第9页 |
| ·m6A在mRNA中的分布 | 第9-10页 |
| ·m6A甲基转移酶 | 第10-11页 |
| ·m6A结合蛋白 | 第11-12页 |
| ·m6A去甲基化酶：FTO和ALKBH5 | 第12-14页 |
| ·m6A修饰和先天免疫 | 第14-15页 |
| ·m6A修饰的生物学意义 | 第15-16页 |
| ·肥胖相关基因FTO的研究 | 第16-21页 |
| ·FTO基因 | 第16页 |
| ·FTO基因与肥胖相关 | 第16-17页 |
| ·FTO基因对脂肪组织的中枢效应与直接影响 | 第17-18页 |
| ·FTO基因内含子区单核苷酸多态性与功能相关性 | 第18-21页 |
| ·FTO和ALKBH5是2OG加氧酶 | 第21-23页 |
| ·FTO和ALKBH5属于AlkB家族 | 第21-22页 |
| ·FTO/3-meT复合物晶体结构 | 第22-23页 |
| ·2OG加氧酶抑制剂的研究 | 第23-27页 |
| ·2OG加氧酶家族通用抑制剂模板 | 第24-26页 |
| ·2OG加氧酶底物竞争性抑制剂 | 第26-27页 |
| ·FTO抑制剂研究现状 | 第27页 |
| ·研究的主要内容和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-43页 |
| ·实验材料及仪器 | 第28-30页 |
| ·试剂及抗体 | 第28-29页 |
| ·常用缓冲液及培养基的配制 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-43页 |
| ·ALKBH5的基因克隆与载体构建 | 第30-32页 |
| ·大肠杆菌表达系统表达ALKBH5蛋白 | 第32-33页 |
| ·ALKBH5蛋白纯化 | 第33-35页 |
| ·ALKBH5蛋白的结晶筛选 | 第35-36页 |
| ·ALKBH5蛋白晶体衍射数据的收集 | 第36页 |
| ·FTO抑制剂的计算机辅助药物设计 | 第36页 |
| ·FTOΔ31-His融合蛋白的表达和纯化 | 第36-37页 |
| ·FTO抑制剂活性检测 | 第37-38页 |
| ·FTO过表达细胞系的构建 | 第38-40页 |
| ·mRNA中m6A的含量的测定 | 第40-43页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第43-63页 |
| ·ALKBH5蛋白的表达与纯化 | 第43-48页 |
| ·ALKBH5基因克隆 | 第43页 |
| ·ALKBH5蛋白的表达 | 第43页 |
| ·ALKBH5蛋白的纯化 | 第43-45页 |
| ·ALKBH5表达片段的优化 | 第45-48页 |
| ·ALKHB5的晶体培养与衍射数据收集 | 第48-51页 |
| ·ALKHB5的晶体培养与优化 | 第48-49页 |
| ·ALKHB5硒代衍生物蛋白的表达与结晶 | 第49-50页 |
| ·ALKBH5晶体衍射数据的收集 | 第50-51页 |
| ·FTO抑制剂的筛选 | 第51-60页 |
| ·FTO蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| ·FTO抑制剂的初步筛选 | 第52-53页 |
| ·5种化合物抑制FTO对ssDNA上的m6A去甲基化 | 第53-56页 |
| ·化合物抑制FTO对ssRNA上的m6A去甲基化 | 第56页 |
| ·化合物靶标酶选择性 | 第56-58页 |
| ·FTO过表达HEK293细胞系的建立 | 第58页 |
| ·化合物细胞活性测定 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·ALKBH5可能具有20G加氧酶家族类似的催化结构 | 第60页 |
| ·ALKBH5可能具有特有的底物识别机制 | 第60-61页 |
| ·FTO抑制剂的筛选方法 | 第61页 |
| ·FTO抑制剂具有一定广谱性 | 第61-62页 |
| ·FTO抑制剂和药物 | 第62-63页 |
| 第四章 结论与展望 | 第63-64页 |
| ·获得ALKBH5的晶体衍射数据 | 第63页 |
| ·筛选出多种FTO抑制剂 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录一 化合物编号及其分子式 | 第75-76页 |
| 附录二 HPLC检测小分子化合物对FTO的抑制作用 | 第76-89页 |
| 个人简历 | 第89页 |
