| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-41页 |
| ·植物的次生代谢 | 第15-16页 |
| ·类黄酮的研究 | 第16-18页 |
| ·类黄酮的结构与分布 | 第16-17页 |
| ·类黄酮的功能 | 第17-18页 |
| ·大豆异黄酮的研究 | 第18-20页 |
| ·大豆异黄酮的结构 | 第18-19页 |
| ·大豆异黄酮的功能 | 第19-20页 |
| ·大豆类黄酮的生物合成途径 | 第20-24页 |
| ·苯基丙酸类（Phenylpropanoid）代谢途径简介 | 第20-21页 |
| ·黄酮合成酶研究进展 | 第21-22页 |
| ·异黄酮合成酶的研究进展 | 第22-23页 |
| ·黄烷酮 3-羟化酶的研究 | 第23页 |
| ·其他关键酶的研究 | 第23-24页 |
| ·代谢工程在植物中的应用 | 第24-27页 |
| ·代谢工程简介 | 第24-25页 |
| ·加速限速反应 | 第25-26页 |
| ·转录调控因子策略 | 第26页 |
| ·改变代谢途径流向 | 第26-27页 |
| ·RNAi 的研究进展 | 第27-32页 |
| ·RNAi 的发现 | 第27-28页 |
| ·RNAi 的原理 | 第28页 |
| ·RNAi 在植物代谢工程中的应用 | 第28-30页 |
| ·RNAi 植物表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·大豆遗传转化方法 | 第32-34页 |
| ·农杆菌介导法 | 第32-33页 |
| ·基因枪法 | 第33页 |
| ·花粉管通道法 | 第33-34页 |
| ·毛状根的研究进展与应用 | 第34-38页 |
| ·Ri 质粒 | 第35页 |
| ·发根农杆菌转化机制 | 第35-36页 |
| ·发根农杆菌的植物转化方法 | 第36-37页 |
| ·毛状根的应用 | 第37-38页 |
| ·大豆病害的研究进展 | 第38-41页 |
| ·大豆主要病害简介 | 第38-39页 |
| ·次生代谢物质的抗病机制 | 第39-41页 |
| 第二章 本课题研究的内容和意义 | 第41-43页 |
| ·本课题研究的内容 | 第41页 |
| ·本课题研究的意义 | 第41-43页 |
| 第三章 大豆黄酮合成酶基因的克隆与功能鉴定 | 第43-93页 |
| ·材料和试剂 | 第43-47页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·质粒和菌种 | 第43页 |
| ·实验试剂 | 第43-44页 |
| ·培养基和溶液配方 | 第44-46页 |
| ·PCR 扩增所用引物列表 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-72页 |
| ·植物总 RNA 的提取（TRIzol 法）及检测 | 第47-50页 |
| ·第一链 cDNA 的合成 | 第50-51页 |
| ·GmFNS Ⅱ cDNA 全长片段的克隆 | 第51-52页 |
| ·目的片段的电泳回收 | 第52-53页 |
| ·载体与目的 DNA 片断的连接 | 第53页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第53-55页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第55-58页 |
| ·生物信息学分析 | 第58-59页 |
| ·GmFNSⅡ 蛋白的原核表达分析 | 第59-61页 |
| ·体外酵母表达分析酶的活性 | 第61-66页 |
| ·亚细胞定位 | 第66-68页 |
| ·Real Time RT-PCR 反应 | 第68-72页 |
| ·实验结果与分析 | 第72-91页 |
| ·两个候选 GmFNS Ⅱ 基因 cDNA 的克隆 | 第72-73页 |
| ·两个候选 GmFNS Ⅱ 基因的生物信息学分析 | 第73-83页 |
| ·两个候选 GmFNS Ⅱ 基因在原核细胞中的表达 | 第83-85页 |
| ·酵母表达验证候选基因具有黄酮合成酶活性 | 第85-87页 |
| ·GmFNSⅡ-1 与 GmFNSⅡ-2 的亚细胞定位 | 第87-89页 |
| ·GmFNSⅡ-1 与 GmFNSⅡ-2 的组织特异性表达 | 第89-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| ·GmFNSⅡ 的克隆 | 第91页 |
| ·GmFNSⅡ 的功能 | 第91-93页 |
| 第四章 RNA 干扰型植物表达载体的构建 | 第93-117页 |
| ·材料与试剂 | 第93-95页 |
| ·植物材料 | 第93页 |
| ·质粒和菌种 | 第93页 |
| ·实验试剂 | 第93页 |
| ·培养基和溶液配方 | 第93-94页 |
| ·PCR 扩增所用引物列表 | 第94-95页 |
| ·实验方法 | 第95-103页 |
| ·植物总 RNA 的提取（TRIzol 法）及检测 | 第95页 |
| ·第一链 cDNA 的合成 | 第95页 |
| ·目的基因 cDNA 全长的克隆 | 第95-96页 |
| ·目的片段的电泳回收 | 第96页 |
| ·载体和目的 DNA 片断的连接 | 第96页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第96-97页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第97页 |
| ·GmFNSⅡ RNAi 植物表达载体的构建 | 第97-99页 |
| ·F3H RNAi 植物表达载体的构建 | 第99-100页 |
| ·p3300–GmFNSⅡi–F3Hi 的构建 | 第100-103页 |
| ·实验结果与分析 | 第103-113页 |
| ·目的基因的克隆 | 第103-104页 |
| ·干扰片段的克隆 | 第104-106页 |
| ·pHANNIBAL-gene-RNAi 的构建 | 第106-108页 |
| ·P1304+-GmFNSⅡ-RNAi 载体的构建 | 第108-110页 |
| ·p3300-GmFNSⅡi 与 p3300-F3Hi 载体的构建 | 第110-111页 |
| ·p3300-GmFNSⅡi-F3Hi 的构建 | 第111-112页 |
| ·载体构建流程图 | 第112-113页 |
| ·讨论 | 第113-117页 |
| ·植物中 RNAi 的作用过程 | 第113-114页 |
| ·植物中 RNA 干扰表达载体的构建 | 第114-117页 |
| 第五章 发根农杆菌介导的大豆转化 | 第117-149页 |
| ·材料与方法 | 第117-120页 |
| ·植物材料 | 第117页 |
| ·质粒和菌种 | 第117页 |
| ·实验试剂 | 第117页 |
| ·培养基和溶液配方 | 第117-119页 |
| ·PCR 扩增所用引物列表 | 第119-120页 |
| ·实验方法 | 第120-133页 |
| ·植物表达载体导入农杆菌 | 第120-122页 |
| ·发根农杆菌诱导大豆毛状根的生成 | 第122-124页 |
| ·植物基因组 DNA 提取 | 第124-127页 |
| ·毛状根 PCR 检测 | 第127-128页 |
| ·Gus 基因的组织化学检测 | 第128-129页 |
| ·植物总 RNA 的提取（TRIzol 法）及检测 | 第129页 |
| ·第一链 cDNA 的合成 | 第129页 |
| ·定量 PCR 分析 | 第129页 |
| ·HPLC 测定毛状根中类黄酮含量 | 第129-130页 |
| ·转基因植株的 Southern 杂交 | 第130-133页 |
| ·实验结果与分析 | 第133-147页 |
| ·RNAi 植物表达载体导入农杆菌 | 第133-135页 |
| ·毛状根的生成情况分析 | 第135-137页 |
| ·毛状根的 PCR 检测 | 第137-139页 |
| ·毛状根的 GUS 组织化学检测 | 第139-140页 |
| ·转基因毛状根的 Southern blotting 分析 | 第140-141页 |
| ·RNAi 载体上基因表达的变化 | 第141-145页 |
| ·HPLC 分析毛状根中类黄酮的含量变化 | 第145-147页 |
| ·讨论 | 第147-149页 |
| ·发根农杆菌介导的植物转化 | 第147页 |
| ·大豆类黄酮代谢的基因调控 | 第147-149页 |
| 第六章 类黄酮对大豆病原菌生长的影响 | 第149-157页 |
| ·材料和试剂 | 第149-150页 |
| ·病原菌菌种 | 第149页 |
| ·试剂 | 第149页 |
| ·培养基 | 第149-150页 |
| ·实验方法 | 第150-151页 |
| ·病原菌的预培养 | 第150页 |
| ·病原菌生长面积测量 | 第150-151页 |
| ·数据处理 | 第151页 |
| ·实验结果 | 第151-156页 |
| ·病原菌生长速度 | 第151页 |
| ·第一组实验结果分析 | 第151-152页 |
| ·第二组实验结果分析 | 第152-156页 |
| ·讨论 | 第156-157页 |
| 第七章 本研究的创新点与今后工作展望 | 第157-160页 |
| ·研究的主要结论 | 第157-158页 |
| ·研究的创新之处 | 第158-159页 |
| ·研究中发现的问题 | 第159页 |
| ·今后工作展望 | 第159-160页 |
| 附录 符号说明 | 第160-161页 |
| 参考文献 | 第161-173页 |
| 致谢 | 第173-175页 |
| 博士期间发表的论文和专利 | 第175页 |
