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一株鞘氨醇杆菌合成类胡萝卜素的分子机制和代谢杂环的氧化压力研究

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-18页
第一章 前言第18-34页
   ·环境微生物对杂环化合物的代谢第18-22页
   ·自由基生物学概述第22-25页
   ·细胞抗氧化机制的建立第25-27页
     ·酶类抗氧化物第26页
     ·非酶类抗氧化物第26-27页
   ·类胡萝卜素及其合成途径研究进展第27-33页
     ·类胡萝卜素第27-28页
     ·类胡萝卜素的生理功能第28-29页
     ·类胡萝卜素的微生物合成途径及相关基因(簇)第29-32页
     ·鞘氨醇单胞菌属与类胡萝卜素第32-33页
   ·本课题的研究意义第33-34页
第二章 鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 类胡萝卜素合成途径及相关基因(簇)的生物信息学分析第34-48页
   ·材料与方法第34-35页
     ·数据来源第34-35页
     ·生物信息学分析第35页
   ·结果与讨论第35-46页
     ·类胡萝卜素合成基因(簇)分析第35-37页
     ·crtE 基因的功能分析第37-38页
     ·crtB 基因的功能分析第38-39页
     ·crtI 基因的功能分析第39-41页
     ·crtY 基因的功能分析第41-42页
     ·crtB,crtI 和 crtY 基因的启动子预测分析第42-43页
     ·crtZ 基因的功能分析第43-45页
     ·crtW 基因的功能分析第45-46页
   ·本章小结第46-48页
第三章 鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 类胡萝卜素合成基因的克隆与功能验证第48-75页
   ·材料与方法第49-56页
     ·主要仪器和试剂第49-54页
     ·培养基和培养条件第54页
     ·基因克隆及质粒构建第54-55页
     ·大肠杆菌双质粒共表达工程菌的构建第55页
     ·高效液相色谱(HPLC)分析第55页
     ·四极杆--飞行时间串联质谱分析 (Q-TOF LC/MS)第55-56页
   ·结果与讨论第56-73页
     ·基因克隆第56-57页
     ·质粒构建第57-60页
     ·八氢番茄红素脱氢酶与番茄红素环化酶基因功能验证第60-65页
     ·GGPP 合成酶与八氢番茄红素合成酶基因的功能验证第65-66页
     ·β-胡萝卜素羟化酶基因的功能验证第66-68页
     ·β-胡萝卜素酮酶基因的功能验证第68-73页
   ·本章小结第73-75页
第四章 鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 合成类胡萝卜素的鉴定与分析第75-85页
   ·材料与方法第75-77页
     ·XLDN2-5 所含类胡萝卜素的分析鉴定第75-76页
     ·杂环化合物的代谢对 XLDN2-5 类胡萝卜素合成的影响第76-77页
   ·实验结果第77-83页
     ·XLDN2-5 所含类胡萝卜素的分析鉴定第77-80页
     ·杂环化合物的代谢对 XLDN2-5 类胡萝卜素合成的影响第80-83页
   ·讨论第83-84页
   ·本章小结第84-85页
第五章 鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 在代谢杂环化合物过程中类胡萝卜素合成关键基因表达水平研究第85-100页
   ·材料与方法第86-89页
     ·主要仪器和试剂第86-87页
     ·培养条件与 RNA 提取第87-88页
     ·cDNA 的合成第88页
     ·RT-qPCR第88-89页
   ·结果与讨论第89-99页
     ·RNA 提取的质量检测第89-90页
     ·RT-PCR 测定类胡萝卜素合成相关基因的表达第90-92页
     ·crtI 与 crtZ 基因表达水平分析第92-99页
   ·本章小结第99-100页
第六章 鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 代谢杂环化合物过程中细胞内的氧化压力研究第100-115页
   ·材料与方法第101-104页
     ·主要仪器和试剂第101-102页
     ·活性氧自由基(ROS)的测定第102页
     ·菌株 XLDN2-5 对杂环化合物的持续降解能力第102页
     ·类胡萝卜素玉米黄质的分离纯化第102-103页
     ·类胡萝卜素对羟自由基的清除能力测定第103页
     ·抗氧化剂对羟自由基的清除效率的计算第103页
     ·DBT 降解过程中自由基的检测方法第103-104页
     ·积累类胡萝卜素的 E.coli 生长曲线的测定第104页
   ·实验结果第104-111页
     ·鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 细胞内 ROS 分析第104-105页
     ·鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 对杂环化合物的持续降解能力第105-107页
     ·鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 中玉米黄质分离纯化第107-108页
     ·类胡萝卜素对羟自由基的清除能力分析第108-109页
     ·DBT 降解过程中自由基的产生第109-110页
     ·类胡萝卜素的积累对 E.coli 菌株生长的影响第110-111页
   ·讨论第111-113页
   ·本章小结第113-115页
第七章 鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 与两株咔唑降解假单胞菌的全基因组测序及组学分析第115-127页
   ·材料与方法第116-117页
     ·施氏假单胞菌 XLDN-R 利用咔唑生长实验第116页
     ·测序、拼接与注释方法第116-117页
     ·基因组与蛋白质组数据分析与氧化压力抗性有关的蛋白第117页
   ·结果与讨论第117-126页
     ·施氏假单胞菌 XLDN-R 利用咔唑生长实验第117-119页
     ·基因组测序拼接与注释结果第119-120页
     ·几株已测序的杂环化合物降解菌基因组的比对分析第120-123页
     ·鞘氨醇杆菌 XLDN2-5 蛋白质组分析第123-126页
   ·本章小结第126-127页
结束语第127-131页
参考文献第131-147页
附录第147-149页
攻读博士期间论文发表及专利申请情况第149-150页
致谢第150-151页

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