棉花多酚氧化酶基因及其启动子序列的克隆与分析
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-14页 |
| ·研究背景与意义 | 第11页 |
| ·多酚氧化酶的研究现状 | 第11-13页 |
| ·启动子的研究 | 第13-14页 |
| 第二章 棉花多酚氧化酶基因的克隆 | 第14-32页 |
| ·材料 | 第14-16页 |
| ·实验材料 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14页 |
| ·主要的试剂盒、试剂和工具酶 | 第14-15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-27页 |
| ·RNA的提取 | 第16-18页 |
| ·RT-PCR得到第一链cDNA | 第18-19页 |
| ·GhPPO基因cDNA全长序列的获得 | 第19-22页 |
| ·DNA片段的凝胶回收 | 第22-23页 |
| ·高效感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·热激法转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选 | 第24页 |
| ·挑斑 | 第24页 |
| ·小量质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·序列测定 | 第25页 |
| ·序列分析 | 第25-26页 |
| ·电子克隆获得棉花多酚氧化酶cDNA全长 | 第26页 |
| ·棉花基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·以基因组DNA为模板,获取棉花PPO基因全长 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·RNA的提取 | 第27页 |
| ·DNA的提取 | 第27页 |
| ·GhPPO基因的克隆及生物信息学分析 | 第27-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 棉花PPO蛋白的原核表达 | 第32-38页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-36页 |
| ·棉花PPO基因原核表达载体的构建 | 第32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·获得含BamH I酶切位点的棉花PPO片段 | 第32页 |
| ·载体线性化 | 第32-33页 |
| ·建立In-Fusion克隆反应 | 第33页 |
| ·转化工程菌BL21 | 第33-34页 |
| ·棉花PPO蛋白的表达 | 第34-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| 第四章 植物表达载体的构建 | 第38-41页 |
| ·村料 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·获得含Sma /酶切位点的棉花PPO片段 | 第38页 |
| ·载体线性化 | 第38-39页 |
| ·建立In-Fusion克隆反应 | 第39页 |
| ·转化工程菌感受态农杆菌LBA4404 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-41页 |
| 第五章 棉花PPO基因启动子的克隆与功能分析 | 第41-50页 |
| ·村料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·棉花PPO基因启动子的克隆 | 第41-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-50页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第46页 |
| ·酶切基因组DNA | 第46页 |
| ·第一次PCR | 第46-47页 |
| ·第二次PCR | 第47页 |
| ·序列分析 | 第47-50页 |
| 第六章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
