环氧水解酶的克隆表达和催化性能研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-18页 |
| ·光学活性环氧化物合成的意义 | 第10-11页 |
| ·光学活性环氧化物的制备 | 第11-12页 |
| ·环氧水解酶 | 第12-16页 |
| ·已经克隆表达的EHs | 第13-14页 |
| ·底物类型 | 第14-15页 |
| ·酶的结构与催化机理 | 第15页 |
| ·EHs在有机合成中的应用 | 第15-16页 |
| ·本课题的意义与研究思路 | 第16-18页 |
| 第2章 毛果树环氧水解酶基因的克隆与表达 | 第18-25页 |
| ·材料与方法 | 第18-22页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器和分析软件 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·毛果杨环氧水解酶基因的克隆 | 第19-21页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第21页 |
| ·环氧化物的酶促水解 | 第21-22页 |
| ·结果与讨论 | 第22-24页 |
| ·基因的选取和PCR结果 | 第22页 |
| ·表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第23-24页 |
| ·环氧化物的酶促水解 | 第24页 |
| ·本章小结 | 第24-25页 |
| 第3章 巨大芽孢杆菌环氧水解酶基因的克隆表达 | 第25-36页 |
| ·基因克隆策略 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-30页 |
| ·菌株和培养基 | 第25-26页 |
| ·巨大芽孢杆菌环氧水解酶的克隆 | 第26-27页 |
| ·重组酶诱导表达的优化 | 第27-28页 |
| ·重组酶的纯化 | 第28页 |
| ·分析方法 | 第28-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-35页 |
| ·巨大芽孢杆菌环氧水解酶基因的预测 | 第30-31页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增 | 第32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·重组酶诱导表达的优化 | 第33-34页 |
| ·BMEH的纯化 | 第34页 |
| ·BMEH的亚基数目 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 第4章 环氧水解酶BMEH底物谱的研究 | 第36-51页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·主要试剂、仪器和分析软件 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·外消旋环氧化物的化学合成 | 第37页 |
| ·重组BMEH的制备 | 第37-38页 |
| ·分析方法的建立 | 第38页 |
| ·绝对构型的确定 | 第38页 |
| ·酶促系列环氧化物水解拆分 | 第38-39页 |
| ·BMEH的同源模建 | 第39页 |
| ·分子对接研究 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-50页 |
| ·消旋环氧化物的合成 | 第39-40页 |
| ·重组BMEH的制备 | 第40页 |
| ·标准曲线和手性分析条件 | 第40-41页 |
| ·底物谱的研究结果 | 第41-44页 |
| ·区域选择性因子测定 | 第44-45页 |
| ·同源模建 | 第45-48页 |
| ·分子对接研究 | 第48-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第5章 BMEH高效催化制备光学纯环氧化物 | 第51-54页 |
| ·材料与方法 | 第51页 |
| ·半制备规模的酶促水解拆分 | 第51页 |
| ·克级规模生物水解制备(S)-2和(R)-2d | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 全文总结与展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-76页 |
| 攻读硕士期间撰写的论文和专利 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
